Page 15 - 南京医科大学自然版

第44卷第6期 徐若薇，韩一芳，周婷婷，等. 全人源抗大别班达病毒抗体的制备及功能鉴定［J］.
2024年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（6）：743-752 ·751 ·

断标志物 ［26］ 。因此本研究将 DBV 抗原 Gn 与 NP 作 China［J］. N Engl J Med，2011，364（16）：1523-1532
为评价恢复期样本血浆中抗体效价的标准，发现恢 ［2］ KUHN J H，ADKINS S，AGWANDA B R，et al. 2021
复期血浆与 DBV⁃Gn 的结合能力较高且 DBV⁃Gn 的 Taxonomic update of phylum Negarnaviricota（Riboviria：
Orthornavirae），including the large orders Bunyavirales
抗体滴度较高，于是利用 Gn 蛋白的 FITC 标记经流
and Mononegavirales［J］. Arch Virol，2021，166（12）：
式分选出的Gn特异性B细胞进行后续研究。
3513-3566
在 B 淋巴细胞表面表达的 BCR 能够特异性结
［3］ SONG H，ZOU S，HUANG Y，et al. The pathogenic and
合抗原，介导适应性体液免疫应答 ［27］ 。本研究从
clinical characteristics of severe fever with thrombocyto⁃
SFTS 恢复期患者血液中分离得到单个 B 细胞进行 penia syndrome patients with co⁃infections［J］. Front Cell
BCR 测序，通过多重 PCR 富集抗体重、轻链可变区 Infect Microbiol，2023，13：1298050
基因，可直接快速得到特异性抗体可变区序列，重、 ［4］ XU Y，SHAO M，LIU N，et al. Clinical feature of severe
轻链天然配对且无需进行人源化改造，稳定性更 fever with thrombocytopenia syndrome（SFTS）⁃associated
强，无需免疫动物和培养噬菌体等，极大地减少了 encephalitis/encephalopathy：a retrospective study［J］.
抗体药物的研发时间。scFv 是由重链可变区和轻 BMC Infect Dis，2021，21（1）：904
［5］ WANG M，HUANG P，LIU W，et al. Risk factors of severe
链可变区通过 linker 序列连接形成的单链蛋白，本
fever with thrombocytopenia syndrome combined with
研究在 scFv 序列 C 端加了 His⁃tag，然后利用 Ni 亲
2+
central neurological complications：a five⁃year retrospec⁃
和层析柱对单链抗体进行纯化。通过对包涵体进
tive case ⁃ control study［J］. Front Microbiol，2022，13：
行脲素梯度复性，6 个抗体复性得率在 2%~20%左 1033946
右。为了降低透析复性对蛋白空间构象和活性造 ［6］ GONG L，ZHANG L，WU J，et al. Clinical progress and
成的影响，后续将进行真核载体的构建以及全分子 risk factors for death from severe fever with thrombocyto⁃
抗体的表达，进一步验证抗体功能。 penia syndrome：a multihospital retrospective investiga⁃
DBV 感染宿主可能会靶向损伤 B 细胞，导致适 tion in Anhui，China［J］. Am J Trop Med Hyg，2021，104
应性免疫应答失调 ［28-29］ ，为本研究获取特异性 B 细 （4）：1425-1431
胞和抗体序列增加了难度。本研究也存在一些不 ［7］ WANG Y，SONG Z，WEI X，et al. Clinical laboratory
parameters and fatality of severe fever with thrombocyto⁃
足，如血液样本均来自 SFTS 恢复期患者，症状有
penia syndrome patients：a systematic review and meta⁃
所改善，但是血常规检查等未完全达到康复的标
analysis［J］. PLoS Negl Trop Dis，2022，16（6）：e0010489
准，导致分选到的特异性 B 细胞较少，在此研究基
［8］ QIAN F，ZHOU W，LIU Y，et al. High C⁃reactive protein
础上，应该进行康复患者的回访与康复样本血液 to lymphocyte ratio predicts mortality outcomes of patients
的采集。 with severe fever with thrombocytopenia syndrome：a
本研究共收集 25 例 SFTS 恢复期患者血液样 multicenter study in China［J］. J Med Virol，2023，95（2）：
本，并以排除 SFTS 诊断的健康志愿者血液样本作 e28546
为阴性对照。经 ELISA 检测发现血浆中抗体与 ［9］ CHEN Q，YANG D，ZHANG Y，et al. Transmission and
DBV⁃Gn 蛋白结合活性较高，使用 CD19⁃APC 抗 mortality risk assessment of severe fever with thrombocy⁃
topenia syndrome in China ：results from 11 ⁃ years ’
体、IgG⁃BV 421 抗体、CD27⁃APC/Cyanine7 抗体和
TM
study［J］. Infect Dis Poverty，2022，11（1）：93
Gn⁃FITC 抗原对磁珠富集到的 B 细胞进行孵育，流
［10］CASEL M A，PARK S J，CHOI Y K. Severe fever with
式分选出Gn特异性单个B细胞进行BCR测序，通过
thrombocytopenia syndrome virus：emerging novel phlebo⁃
原核表达共获得6个单链抗体，用Western blot 检测 virus and their control strategy［J］. Exp Mol Med，2021，
抗体序列His⁃tag，并利用6×His⁃tag⁃HRP经ELISA检 53（5）：713-722
测抗体与DBV的结合活性，结果显示抗体与DBV均 ［11］ LI Z，ZHANG Z，CHEN C. Novel nomograms to predict
具有结合能力，体外病毒中和实验发现抗体 HK11 risk and prognosis in hospitalized patients with severe
对DBV有较好的中和作用，为后续病原体诊断以及 fever with thrombocytopenia syndrome［J］. Front Med
全人源抗体药物的制备奠定了技术基础。 （Lausanne），2023，10：1321490
［12］中华医学会感染病学分会. 发热伴血小板减少综合征
［参考文献］
诊疗共识［J］. 中华传染病杂志，2022，40（12）：711-721
［1］ YU X J，LIANG M F，ZHANG S Y，et al. Fever with ［13］袁义美，崔 宁，袁 春. 发热伴血小板减少综合征命
thrombocytopenia associated with a novel bunyavirus in 名、临床分期及分型的建议［J］. 中华传染病杂志，