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第42卷第12期
               ·1644 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2022年12月


              TNFAIP8L1，and the low expression of the anti ⁃ apoptotic gene TNFAIP8. Conclusion：Olaparib combined with enzalutamide can
              promote the expression of pro⁃apoptotic genes TNFAIP2 and TNFAIP8L1 and inhibit the expression of anti⁃apoptotic gene TNFAIP8 to
              synergistically promote cell apoptosis and inhibit the growth of prostate cancer cells.
             ［Key words］ prostate cancer；combination therapy；enzalutamide；olaparib
                                                                      ［J Nanjing Med Univ，2022，42（12）：1643⁃1650，1672］





                  前列腺癌在全球男性恶性肿瘤中的发病率已跃                          准用于治疗HRR突变的前列腺癌患者                  ［10-11］ 。然而，
              居第2位，成为仅次于肺癌的第二高发病率肿瘤 。                           无论在原发前列腺癌还是 CRPC 中 HRR 突变占比
                                                         ［1］
              前列腺癌的危险因素主要为高龄与肥胖，并且在人                            均不高，许多不携带HRR基因缺陷的患者并没有机
              类发展指数越高的国家，前列腺癌的发病率也随之                            会使用 PARP 抑制剂       ［12-13］ 。药物联合使用是治疗恶
                  ［2］
              增加 。我国前列腺癌的发病率呈逐年上升之势，目                           行肿瘤的常见策略，本研究通过细胞实验结合生物
                                                      ［3］
              前已位列男性泌尿系统恶性肿瘤死亡率第1位 。对                           信息学分析阐述联合使用ENZ和OLA以抑制CRPC
              于无法手术或是术后复发的前列腺癌患者，雄激素                            细胞系C4⁃2生长并促进其凋亡的分子机制，为将来
              剥夺疗法（androgen deprivation therapy，ADT）是首选         在临床上联合使用ENZ及OLA提供理论依据。
              的治疗方案，其治疗转移性前列腺癌的初始反应率
                                                                1  材料和方法
                         ［4］
              高达约 80%      。尽管 ADT 在最初几年有效，但患
              者最终会因耐药进展成为去势抵抗性前列腺癌                              1.1  材料
             （castration⁃resistant prostate cancer，CRPC），此时中         人前列腺癌细胞 C4⁃2 购自中科院上海细胞
                                   ［5］
              位生存期仅为14.5个月 。在欧美国家，尽管前列                          库。RPMI1640培养基、胎牛血清、青霉素/链霉素双
              腺癌的总体发病率下降，但近年来被诊断出远处转                            抗（Gibco 公司，美国）；RIPA 裂解液、TRIzol 裂解液
              移的患者数却有所增加，因此进一步研究前列腺癌                            （Invitrogen 公司，美国）；蛋白酶抑制剂（Bimake 公
              的药物治疗方法显得尤为重要 。                                   司，美国）；PageRuler 蛋白Marker、Pierce Co⁃IP Kit
                                         ［6］
                                                                                                     TM
                                                                                  TM
                  新一代抗雄药物恩杂鲁胺（enzalutamide，ENZ）                 （Thermo Scientific 公司，美国）；ENZ（MCE 公司，美
              于2012年获批上市，之后作为转移性去势抵抗性前                          国）；OLA（Selleck 公司，美国）；PARP1 抗体（Santa⁃
              列腺癌（metastatic CRPC，mCRPC）的一线治疗方案                 cruz 公司，美国）；肿瘤坏死因子α诱导蛋白 8（tumor
              取得成功，多项Ⅲ期临床试验表明 ENZ 可以将                           necrosis factor alpha⁃induced protein 8，TNFAIP8）抗
                                          ［7-8］
              CRPC 转移率/死亡率降低 71%             。虽然最初 ENZ          体（Abcam公司，英国）；反转录试剂盒（Takara公司，
              有效，但最终在大多数 CRPC 中仍然产生耐药并失                         日本）；CCK⁃8试剂盒（同仁公司，日本）；染料法定量
              效。DNA 损伤修复（DNA damage repair，DDR）是细               PCR 试剂盒（南京诺唯赞公司）；SDS⁃PAGE 蛋白上
              胞生存的一种必备机制，其对受损的细胞进行修                             样缓冲液、Western抗体稀释液、抗荧光灭封片液、免
              复。而相反地，破坏肿瘤细胞的DDR则可以导致肿                           疫 染 色 封 闭 液、免 疫 染 色 固 定 液、Phospho ⁃ His⁃
              瘤细胞死亡。DNA 损伤包括了单链损伤（single                        toneH2AX兔抗（上海碧云天公司）；细胞凋亡检测试
              strand break，SSB）和双链损伤（double strand break，       剂盒（杭州联科公司）。
              DSB）。多腺苷二磷酸核糖聚合酶（poly ADP⁃ribose                  1.2  方法
              polymerase，PARP）是一个参与DDR并主要负责SSB                  1.2.1 细胞培养
              修复的蛋白质家族，PARP 抑制剂可以抑制细胞的                               将RPMI 1640原始培养基中加入10%胎牛血清

              SSB 修复进程。而在同源重组修复（homologous re⁃                  以及1%青霉素/链霉素双抗配制成完全培养基。细
              combination repair，HRR）突变的细胞中，DSB修复进              胞培养于37 ℃、5% CO2的细胞培养箱中。细胞的换
              程同样受损。当同时失去了SSB及DSB的修复作用                          液周期为2 d。
              后，不断堆积的 DNA 损伤导致细胞死亡。PARP 抑                       1.2.2  细胞半抑制浓度（half maximal inhibitory con⁃
              制剂在乳腺癌和卵巢癌中成功应用并且具有不良反                            centration，IC50 ）以及联合指数（combination index，
              应小的特点，因而成为前列腺癌治疗的研究热点 。                           CI）的测定
                                                         ［9］
              PARP 抑制剂奥拉帕利（olaparib，OLA）近期已被批                        取对数生长期的前列腺癌细胞，以 1 000 个/孔
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