Page 12 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第12期
·1648 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年12月
A DAPI γH2AX Merge B
（ % ） 100 *** **
γH2AX阳性细胞比例 40 0
DMSO 80
60
20
ENZ+OLA
OLA DMSO ENZ OLA
ENZ
ENZ+OLA
A：在C4⁃2中加入DMSO、ENZ、OLA以及ENZ+OLA 后γH2AX免疫荧光的代表性图片（×400）；B：γH2AX信号细胞占C4⁃2细胞的百分比。
两组比较，P < 0.01， P < 0.001。
***
**
图4 联合使用ENZ和OLA对前列腺癌细胞C4⁃2 DSB的影响
Figure 4 Effects of combined use of ENZ and OLA on DSB in C4⁃2 cell line
源性的经典途径分为TNF通路以及Fas信号转导通 为了进一步验证联合用药后其相关凋亡基因
路，其都通过TNF受体来实现。二代测序结果分析 的变化，分别在 C4⁃2 细胞系中用 DMSO、ENZ、OLA
发现，TNF 表达量较少，在单用 ENZ 或 OLA 细胞中 及 ENZ+OLA 处理后提取 mRNA 及蛋白质。利用
其表达相对于对照组均没有明显变化，在联合用药 qRT⁃PCR验证TNF、TNFAIP2、TNFAIP8在C4⁃2细胞
组其表达增加但无统计学意义（图5）。这意味着联 系中的表达情况（图6A）。通过Western blot 进一步
合用药可能通过促进 TNF 来实现外源性地激活凋 验证TNFAIP8分别在DMSO、ENZ、OLA以及ENZ联
亡途径。进一步筛选了TNF相关基因，发现联合使 合 OLA 处理 C4⁃2 后的表达（图 6B）。同时发现
用 ENZ 和 OLA 后 TNF 家族中 TNFAIP2、TNFAIP8 及 PARP1 的表达在 ENZ 和 ENZ 联合 OLA 组也有一定
TNFAIP8L1在联合用药组具有显著变化（图5）。 程度的降低（图 6B）。通过对 TCGA 及 GTEx 数据库
DMSO
DMSO
DMSO ENZ DMSO
ENZ
ENZ OLA ENZ
OLA
OLA ENZ+OLA OLA
ENZ+OLA **
ENZ+OLA ENZ+OLA
1.5 15 *** 20 * 15 * **
FPKM 1.0 FPKM 10 FPKM 15 FPKM 10
10
5
0.5
5 5
0.0 0 0 0
TNF TNFAIP2 TNFAIP8 TNFAIP8L1
两组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001。
*
***
**
图5 联合使用ENZ和OLA对前列腺癌细胞C4⁃2 TNF通路相关基因的影响
Figure 5 Effects of combined use of ENZ and OLA on TNF pathway⁃related genes in C4⁃2 cell line
