Page 16 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第12期
·1652 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年12月

undefined Cyanobacteria genus（58.70%）. There were no remarkably differences in the abundance and diversity of gastric microflora
between the two groups（ACE index P=0.213，Chaol index P=0.280；Shannon index P=0.391，Simpson index P=0.205）. Principal
component analysis found that the two groups had a considerable difference in the structure of the gastric microbiota，and the difference
between the two groups was greater than the difference within the groups（R=0.368，P=0.032）. DCA treatment significantly increased
the abundance of Cyanobacteria in the stomach of INS⁃GAS mice at the levels of phylum，class，order，family and genus，and also
upregulated the abundance of the Anaerostipes genus and the Cyanobacteria genus Lolium perenne and Phaseolus vulgaris. In addition，

significantly higher enrichment of Lactobacillus including Lactobacillus reuteri，belonging to the phylum Firmicutes was found in gastric
contents of INS⁃GAS mice drinking DCA compared with the control group. The expression of muc2 mRNA in the gastric body and
antrum mucosa of INS⁃GAS mice drinking DCA was considerably higher than that of INS⁃GAS mice drinking NS（both P < 0.05）. The
abundance of gastric microbiota in the stomach of INS⁃GAS mice with the same DCA intervention was significantly higher than that of
FVB/N mice（ACE index P=0.022；Chao1 index P=0.028）. However，INS⁃GAS（DCA）and FVB/N（DCA）mice had greater differences
within groups than between groups（R=-0.056，P=0.647）. Conclusion：DCA intake changed the structure of the gastric microbiota of
INS⁃GAS mice. The relative abundances of Cyanobacteria and Anaerossipes were significantly increased，while the relative abundance
of Lactobacillus decreased，and promoted the expression of Muc2 mRNA.
［Key words］ deoxycholic acid；INS⁃GAS mice；gastric microbiota；16S rRNA，gastric cancer
［J Nanjing Med Univ，2022，42（12）：1651⁃1657］

在消化道微生物研究史上，胃器官因其酸性环 腺体萎缩肠化、异型增生甚至癌变。20个月龄的INS⁃
境曾被认为不适合细菌生长。1982 年 Marshall 和 GAS小鼠可自发形成胃粘膜萎缩肠化、异型增生、原
Warren 发现胃内幽门螺杆菌（Helicobacter pylori， 位癌，甚至是伴有血管侵犯的进展期胃癌，而同月龄
Hp）的存在及定植，推动了科学界对胃内菌群的认 野生型FVB/N小鼠未见上述改变，因此INS⁃GAS小鼠
识。胃内菌群丰度介于1×10 ~1×10 CFU/g，并受到 是模拟人肠型胃癌发生发展的良好动物模型 ［8-9］ 。
4
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胃内酸碱度影响而动态变化 。通过对使用了下一 16S rDNA 扩增子测序（16S rDNA amplicon se⁃
［1］
代测序技术、16S rDNA一代测序技术、菌群指纹识别 quencing）针对细菌核糖体小亚基 16S rRNA 的保守
技术及 PhyloChip 芯片技术的 8 项研究汇总分析发 区域设计通用引物进行PCR扩增，对V3⁃V4高变区
现，人胃内菌群门水平丰度最高为变形菌门、厚壁菌 域进行测序分析和菌种鉴定，是研究机体菌群组成
门、拟杆菌门、放线菌门和梭杆菌门 。越来越多的 结构的重要手段。本研究旨在应用 16S rDNA 扩增
［2］
证据表明，胃内菌群刺激炎症发生、促进细胞增殖、干 子测序探究脱氧胆酸对肠型胃癌模型INS⁃GAS小鼠
细胞生理失调和异常代谢物产生，进而促进胃癌发生 胃内菌群结构的影响，以期揭示这种胃内菌群变化
［3］
发展 。其中，Hp是公认的一类致癌因子 ，除Hp外 对胃癌发生发展的潜在作用。
［4］
其他胃内细菌也参与了致癌过程。16S rRNA基因测
1 对象和方法
序发现胃癌患者胃黏膜乳杆菌属、轻型链球菌、副血
链球菌、普氏菌属、韦荣球菌属丰度显著增高 。 1.1 对象
［5］
早在1978年，临床研究就发现次级胆汁酸特别 FVB/N⁃Tg（Ins1⁃GAS）1Sbr/J 基因工程小鼠（简
是脱氧胆酸（deoxycholic acid，DCA）是胃内十二指 称 INS⁃GAS 小鼠）委托江苏集萃药康生物科技有限
肠反流液的主要成分。疏水性次级胆汁酸通过促 公司自美国 JAX 实验室引进并稳定繁育。本项研
进 DNA 损伤、调节基因表达及胆汁酸受体、影响肠 究共纳入10只7周龄雄性INS⁃GAS小鼠及5只同窝
道菌群等方式促进多种消化道肿瘤（包括食管、胃、 雄性 FVB/N 野生型小鼠，体重 23~25 g［动物合格证
结肠及肝胆、胰腺）发生发展 。近期有研究采用液 号为SCXK（苏）2018⁃0008］，于南京医科大学五台动
［6］
相色谱串联质谱法分析慢性浅表性胃炎、萎缩肠化 物房无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级别
及胃癌组织胃液中胆汁酸谱，发现胃液内DCA水平 屏障设施饲养。5 只野生型 FVB/N 小鼠饲养在一
［7］
随患者胃黏膜异型程度而逐步升高 。基于FVB/N 笼，10只INS⁃GAS转基因小鼠随机平均分配到2笼，
近交系遗传背景的胰岛素⁃胃泌素（insulin⁃gastrin， 每笼 5 只。所有小鼠适应环境 1 周后达 8 周龄时开
INS⁃GAS）基因工程小鼠血清胃泌素过表达，促进胃 始正式实验，本研究通过南京医科大学实验动物福