Page 38 - 南京医科大学自然版

第44卷第12期
·1652 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2024年12月

U373、U87和U251 3种人胶质瘤细胞系，通过RT⁃PCR 2.2 SAMD13过表达和小干扰质粒的构建与鉴定
和 Western blot 实 验 发 现 这 3 种 细 胞 系 均 表 达 以 pIRES2⁃EGFP 质粒为载体，构建人 SAMD13
SAMD13（图 1C、D），其中以 U373 细胞的表达量最 基因过表达质粒（pIRES2⁃SAMD13）。将 pIRES2⁃
高，故后续拟选用U373细胞开展相应体外实验。 EGFP 和 pIRES2⁃SAMD13 质粒转染 U373 细胞 48 h，

A B
n=518 * Overall survival
4 n=163 1.0 Low SAMD13 TPM
High SAMD13 TPM
3 0.8 Log⁃rank P=0.011
Percent survival n （Low） =337
n=207 n=207 HR （High） =1.4
n （High） =337
2 0.6 P （HR） =0.011
1 0.4
0.2
0
0
Tumor Normal Tumor Normal
LGG GBM 0 50 100 150 200
Time（months）
C D F
U373 U87 U251 3 ** U373 U87 U251 4 **
SAMD13 434 bp mRNA levels SAMD13 14 kDa protein levels

GAPDH 203 bp 2 β⁃actin 42 kDa 3 2
Relative SAMD13 1 Relative SAMD13 1

0
U373 U87 U251 0 U373 U87 U251
A：SAMD13 expression in tumor tissues and adjacent normal tissues of glioma patients was shown by the GEPIA database；B：The association be⁃
tween SAMD13 expression and prognosis of glioma patients was analyzed by the GEPIA database（n （high） =337，n （low） =337）. C：SAMD13 mRNA expression
in glioma cell lines was examined by RT⁃PCR（n=3）. D：The expression levels of SAMD13 protein in glioma cell lines were detected by Western blot（n=
*
**
3）. P < 0.05 and P < 0.01. HR：hazards ratio.
图1 胶质瘤组织和细胞系中SAMD13的表达情况
Figure 1 SAMD13 expression in glioma tissues and cell lines

行 Western blot 检测 SAMD13 的表达水平，结果表 增加（图 3A）。同时，开展 Transwell 实验发现，转染
明，与pIRES2⁃EGFP质粒转染组相比，转染pIRES2⁃ pIRES2⁃SAMD13 质粒后，Transwell 膜上富集的细
SAMD13 质粒后 U373 细胞中 SAMD13 的表达显著 胞数明显多于 pIRES2⁃EGFP 质粒转染组（图 3B）。
上调（图 2A）。设计并合成针对人 SAMD13 基因的 提示，过表达 SAMD13 后 U373 细胞的侵袭能力明
3 个 不 同 靶 点 的 shRNA 质 粒（shSAMD13 ⁃ 1、 显增强。
shSAMD13 ⁃ 2、shSAMD13 ⁃ 3）和 对 照 shRNA 质 粒 2.4 沉默SAMD13基因抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭
（shCTR），将上述质粒分别转染 U373 细胞，进行 将 shCTR 和 shSAMD13 质粒分别转染 U373 细
靶点筛选。Western blot 检查发现，shSAMD13⁃1 降 胞，并于48 h后行CCK⁃8检测细胞增殖能力，结果发
低 SAMD13 蛋白表达的能力最强（图 2B），故后续 现，与shCTR质粒转染组相比，转染shSAMD13质粒
采用 shSAMD13⁃1 进行实验，并简称为 shSAMD13。 后U373细胞的增殖能力明显下降（图4A），同时，进

2.3 过表达 SAMD13 基因促进胶质瘤细胞增殖和 行了 Transwell 实验，发现转染 shSAMD13 质粒后，
侵袭 U373 细胞的侵袭能力明显弱于 shCTR 质粒转染组
将 pIRES2⁃EGFP 和 pIRES2⁃SAMD13 质粒分别 （图4B）。
转染 U373 细胞 48 h，行 CCK⁃8 检测细胞增殖能力， 2.5 过表达和沉默SAMD13对胶质瘤细胞中Akt1、
结果表明，与 pIRES2⁃EGFP 质粒转染组相比，转染 ERK1/2和STAT3磷酸化的影响
pIRES2⁃SAMD13质粒后U373细胞的增殖能力明显 为了进一步探究 SAMD13 调控 U373 细胞增殖