Page 40 - 南京医科大学自然版
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第44卷第12期
               ·1654 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2024年12月


              A                                                B
                              pIRES2⁃SAMD13
                        pIRES2⁃EGFP            SAMD13                    shCTR  shSAMD13       SAMD13
                                               p⁃Akt1
                                                                                               p⁃Akt1
                                               p⁃ERK1/2                                        p⁃ERK1/2
                 p⁃Akt1          60 kDa    4  一一一一     **  **     p⁃Akt1          60 kDa  1.5  一一一一
                                                                                               p⁃STAT3
                                               p⁃STAT3
                  t⁃Akt1         60 kDa    3  一一一一                t⁃Akt1          60 kDa     一一一一
                                 44 kDa                                           44 kDa  1.0               一一一一
               p⁃ERK1/2                                         p⁃ERK1/2
                                 42 kDa   Relative protein levels  2              42 kDa Relative protein levels
                                 44 kDa                                           44 kDa  0.5      一一一一 一一一一
                t⁃ERK1/2                                        t⁃ERK1/2
                                 42 kDa    1                                      42 kDa               **  ** 一一一一
                                                                 p⁃STAT3
                p⁃STAT3          86 kDa            一一一一 一一一一                      86 kDa  0.0      一一一一     一一一一
                                                                 t⁃STAT3
                t⁃STAT3          86 kDa    0       一一一一 一一一一                      86 kDa      shCTR  shSAMD13  一一一一
                                                   一一一一 一一一一
                                          pIRES2⁃EGFP                             14 kDa
                                 14 kDa
                SAMD13                           pIRES2⁃SAMD13   SAMD13                            一一一一
                 β⁃actin         42 kDa                           β⁃actin         42 kDa
                 A：U373 cells were transfected with pIRES2⁃EGFP and pIRES2⁃SAMD13 plasmids for 48 h，and then the expression and phosphorylation of
                                                                                      **
              SAMD13，Akt1，ERK1/2，and STAT3 were detected by Western blot. Compared with the pIRES2⁃EGFP group，P < 0.01（n=3）. B：U373 cells were
              transfected with shCTR and shSAMD13⁃1 plasmids for 48 h，and then the expression and phosphorylation of SAMD13，Akt1，ERK1/2，and STAT3 were
                                                     **
              examined by Western blot. Compared with the shCTR group，P < 0.01（n=3）.
                               图5 过表达和沉默SAMD13对U373细胞Akt1、ERK1/2和STAT3磷酸化的影响
               Figure 5 Effects of SAMD13 overexpression and knockdown on Akt1，ERK1/2 and STAT3 phosphorylation in U373 cells
              2.6  SAMD13 通过增强 ERK1/2 磷酸化促进胶质瘤                  外实验，检测了 U373、U87 和 U251 3 种胶质瘤细胞
              细胞增殖和侵袭                                           系中的 SAMD13 表达，结果显示，SAMD13 在这 3 种
                  为了进一步探究 SAMD13 通过 ERK1/2 对 U373               细胞系中均表达，并且以 U373 细胞中表达最为显
              细胞增殖和侵袭的调控作用，将 pIRES2⁃EGFP 和                      著，因此，本研究使用 U373 细胞进一步探索。功能
              pIRES2⁃SAMD13 质粒转染 U373 细胞，同时给予                   实验结果表明，过表达 SAMD13 基因可明显增强胶
              ERK1/2 抑制剂 U0126（设 DMSO 溶剂对照组），分别                 质瘤细胞的增殖和侵袭，而沉默SAMD13基因后，胶
              开展了 Western blot、CCK⁃8 和 Transwell 实验，检查          质瘤细胞的增殖能力和侵袭能力均明显降低，提示
              ERK1/2磷酸化、细胞增殖和侵袭。结果表明，转染                         SAMD13表达可正向调控胶质瘤细胞的增殖和侵袭
              pIRES2⁃SAMD13 后，可显著增强 SAMD13 表达和                  等生物学行为。
              ERK1/2 磷酸化（图 6A），并促进细胞增殖（图 6B）                         研究发现，一些信号分子和转录因子（如Akt1、
              和侵袭（图 6C），而在转染 pIRES2⁃SAMD13 质粒后                  ERK1/2和STAT3）的磷酸化激活与胶质瘤细胞的增
              加入 U0126 处理细胞，ERK1/2 的磷酸化（图 6A）、                  殖和侵袭密切相关         ［11-13，15］ ，而SAMD家族成员也可通
              细胞增殖（图 6B）和侵袭（图 6C）均明显减弱，但对                       过调节信号通路的活化来促进肿瘤的进展                    ［16-19］ 。有
              SAMD13 表达无显著影响（图 6A）。提示 SAMD13                    研究表明，SAMD9可以调节MYH9/GSK3β/β⁃catenin
              通过增强 ERK1/2 磷酸化促进胶质瘤细胞增殖和                         通路的活化，最终促进食管鳞状细胞癌细胞的干
              侵袭。                                               性、上皮间充质转化和转移             ［16］ 。在宫颈癌细胞中，
                                                                circSAMD11 高表达，能够通过调节 miR⁃503/SOX4
              3 讨 论
                                                                和激活Wnt/β⁃catenin 通路促进细胞增殖、侵袭和迁
                  SAMD13 在多种器官和细胞中广泛表达，如甲                       移 ［17］ 。SAMD11 也参与胃癌细胞中的信号转导，有
              状腺细胞、心肌细胞、子宫内膜基质细胞和胃肠道                            报道称，与正常组织相比，SAMD12⁃AS1在人胃癌组
              细胞等，但其具体的生物学功能仍不明确。通过                             织和细胞系中高度上调，上调的 SAMD12⁃AS1 主要
              GEPIA 数据库分析发现，胶质瘤患者肿瘤组织中                          通过抑制 p53 信号通路来增强细胞的增殖能力 。
                                                                                                           ［18］
              SAMD13 的表达明显上调，且随着胶质瘤恶性程度                         又有学者发现，lncRNA SAMD12⁃AS1过表达促进肝
              的增加，其表达量也相应升高，同时，SAMD13 的高                        癌细胞的增殖和侵袭，其机制涉及lncRNA SAMD12⁃
              表达与患者的不良预后相关，这表明 SAMD13 可能                        AS1 过表达促进 p53 信号通路的活化，导致细胞发
              在胶质瘤的发生与发展中发挥重要作用。然而，                             生上皮间质转化，最终介导肝癌的恶化                  ［19］ 。但迄今
              SAMD13在胶质瘤细胞增殖和侵袭中的作用与调控                          为止，关于胶质瘤细胞中 SAMD13 高表达对细胞内
              机制尚未有详细研究报道。对此，本研究开展了体                            信号分子和转录因子活性的调控，尚未见文献报
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