Page 8 - 南京医科大学自然版

第45卷第11期
·1538 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年11月

p21 and enhancing its mRNA stability，thereby inhibiting the proliferation of breast cancer cells. These findings suggest that RBMS3
may serve as a potential therapeutic target for breast cancer.
［Key words］ RBMS3；p21；mRNA stability；breast cancer
［J Nanjing Med Univ，2025，45（11）：1537⁃1545，1571］

乳腺癌是全球女性癌症相关死亡的主要原 试剂来源：DMEM 高糖培养基、胎牛血清（南
［1］
因 ，其临床和分子异质性显著，寻找有效治疗靶点 京 维 森 特 公 司）；TRIzol 试 剂（TaKaRa 公 司 ，日
至关重要 。RNA 结合蛋白（RNA⁃binding protein， 本）；HiScript Ⅱ Q RT SuperMix（上海诺维赞公司）；
［2］
RBP）作为转录后调控的关键执行者，在乳腺癌发生 RIPA裂解液（上海碧云天公司）；细胞周期检测试
发展中发挥重要作用 ［3-6］ 。 剂盒、Annexin V⁃APC/7⁃AAD试剂盒（杭州联科生物

RNA 结合基序单链相互作用蛋白3（RNA bind⁃ 公司）；RIPA 裂解液（Millipore 公司，美国）；双荧光
ing motif single stranded interacting protein 3，RBMS3） 素酶报告基因试剂盒（Promega 公司，美国）。一
是 RBP 家族成员，已被证实与多种癌症的进展及 抗：β⁃actin（武汉Proteintech公司），RBMS3（常州 Af⁃
治疗反应相关 ［7-9］ 。在乳腺癌中，RBMS3 功能存在 finity 公司），p21（Cell Signaling Technology 公司，美
争议：一方面可通过抑制 Wnt/β⁃catenin 通路或调 国）；二抗：HRP 标记的山羊抗兔 IgG（Cell Signaling
控 Twist1/MMP2 轴，抑制肿瘤生长与迁移 ［10-11］ ；另 Technology公司，美国）。
一方面也有研究发现其能通过稳定配对相关同源框1 1.2 方法
（paired related homeobox 1，PRRX1）mRNA，促 进 上 1.2.1 慢病毒与小干扰RNA（small interfering RNA，
皮 ⁃ 间 质 转 化（epithelial ⁃ mesenchymal transition， siRNA）转染
EMT）与侵袭 。现有研究多聚焦于RBMS3在迁移、 SUM⁃1315 和 MDA⁃MB⁃231 慢病毒稳转细胞系
［12］
［13］
侵袭及肿瘤免疫调节中的作用 。而其在乳腺癌细 参照前期研究构建 ［11］ ，乳腺癌细胞分别感染RBMS3
胞增殖调控中的具体功能及分子机制尚未明确。 过表达慢病毒（RBMS3 组）和阴性对照慢病毒（NC
因此，本研究旨在阐明RBMS3调控乳腺癌细胞 组）、RBMS3敲低慢病毒（Sh1组、Sh2组）及无序序列
增殖的分子机制。结果显示，RBMS3通过稳定细胞 慢病毒（SCR 组）。p21 小干扰 RNA（Si⁃p21）由上海
周期蛋白依赖性激酶抑制剂 1A（cyclin⁃dependent 吉玛制药设计并合成，序列如下，正义链：5′⁃CCU⁃
kinase inhibitor 1A，CDKN1A，又称p21）mRNA，显著 CUGGCAUUAGAAUUAUTT⁃3′；反义链：5′⁃AUAAU⁃
抑制乳腺癌细胞增殖。该发现揭示了 RBMS3/p21 UCUAAUGCCAGAGGTT⁃3′。
轴在乳腺癌中的作用，为乳腺癌治疗提供了潜在的 1.2.2 实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative
新靶点。 reverse transcription polymerase chain reaction，qRT⁃
PCR）
1 材料和方法
采用 TRIzol 试剂提取总 RNA，测定 RNA 浓度
1.1 材料 与纯度。取 1 000 ng RNA，用 HiScriptⅡ Q RT Su⁃
人乳腺癌细胞系SUM⁃1315由美国密歇根大学 perMix逆转录合成cDNA（反应条件为：37 ℃ 15 min，
安娜堡分校 Stephen Ethier 惠赠；人乳腺癌细胞系 85 ℃ 5 s）。qPCR 采用 ChamQ SYBR Master Mix 构
MDA⁃MB⁃231购自美国ATCC。 建 10 μL 反应体系，在 LightCycler 480 Ⅱ实时荧光
34 例乳腺癌及邻近健康组织样本均来自南京 定量 PCR 仪上运行，扩增条件为：95 ℃预变性 30 s；
医科大学第一附属医院手术切除标本，患者术前未 95 ℃变性10 s，60 ℃退火和延伸30 s，共 40 个循环；
接受新辅助治疗。组织学类型：32例浸润性导管癌， 最后进行熔解曲线分析（95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，
2 例浸润性小叶癌；分子分型：Luminal A 型 9 例、 95 ℃ 15 s）验证扩增特异性。引物序列：β⁃actin 正
Luminal B 型 12 例、HER⁃2 阳性型 5 例、三阴性型 向 5′ ⁃ GCTGTGCTATCCCTGTACGC ⁃ 3′ 、反 向 5′ ⁃
8 例。本研究经南京医科大学第一附属医院伦理委 TGCCTCAGGGCAGCGGAACC⁃ 3′；RBMS3 正向 5′⁃
员会批准（2020⁃SR⁃580）。所有样本均储存于液氮中。 GCATCTCTCAAGGCAAATGG ⁃ 3′ 、反 向 5′ ⁃ CAA⁃