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第45卷第11期 戴欣媛，夏 天，朱 磊，等. RNA结合蛋白RBMS3通过稳定p21 mRNA抑制乳腺癌增殖［J］.
2025年11月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（11）：1537-1545，1571 ·1541 ·

A C E G
600 350 5 0.4% 3.4% 5 5.5% 2.0%
10 10
500 300 10 4 10 4
SUM⁃1315⁃NC Number 300 MDA⁃MB⁃231⁃NC Number 250 SUM⁃1315⁃NC 7⁃AAD⁃A 10 3 Q1 Q2 MDA⁃MB⁃231⁃NC 7⁃AAD⁃A 10 3 Q1 Q2
400
200
Q4
Q3
Q4
Q3
150
200
100 100 10 2 10 2
50
91.6% 4.6% 83.2% 9.3%
0 0
0 5 5 5 5 5 0 5 5 5 5 10 2 10 3 10 4 10 5 10 2 10 3 10 10 5
2×10 4×10 6×10 8×10 10×10 2×10 4×10 6×10 8×10 Annexin V Annexin V
4
FL2⁃APC⁃A FL2⁃APC⁃A
800 600 10 5 0.1% 2.3% 10 5 7.9% 5.8%
SUM⁃1315⁃RBMS3 Number 600 MDA⁃MB⁃231⁃RBMS3 Number 400 SUM⁃1315⁃RBMS3 7⁃AAD⁃A 10 4 3 Q1 Q2 MDA⁃MB⁃231⁃RBMS3 7⁃AAD⁃A 10 4 3 Q1 Q2
500
400
300
Q3
Q3
Q4
Q4
10
10
200
200
0 100 0 10 2 81.2% 16.4% 10 2 69.8% 16.5%
0 5 5 5 5 5 5 0 5 5 5 5 10 2 10 3 10 4 10 5 10 2 10 3 10 10 5
4
2×10 4×10 6×10 8×10 10×10 12×10 2×10 4×10 6×10 8×10 Annexin V Annexin V
FL2⁃APC⁃A FL2⁃APC⁃A
B D F H
SUM⁃1315 MDA⁃MB⁃231 SUM⁃1315 MDA⁃MB⁃231
150 G0/1 S 150 G0/1 S 25 ** 30 ***
G2/M G2/M 20
（%） 100 （%） 100 （%） 15 （%）
Percent 50 Percent 50 Apoptosis 10 Apoptosis 20
10
5
0 0 0 0
NC RBMS3 NC RBMS3 NC RBMS3 NC RBMS3
A-D：Flow cytometry was used to analyze the cell cycle distribution in SUM⁃1315（A，B）and MDA⁃MB⁃231（C，D）cells after RBMS3 overexpres⁃
sion or in the control group. E-H：Apoptosis rate was detected by flow cytometry in SUM⁃1315（E，F）and MDA⁃MB⁃231（G，H）cells overexpressing
**
RBMS3（Q2+Q4；Q2 represents late apoptotic cells，Q4 represents early apoptotic cells；total apoptosis rate=percentage of Q2+Q4 cells）. P < 0.01 and
***
P < 0.001（n=3）.
图2 过表达RBMS3促进乳腺癌细胞周期阻滞和凋亡
Figure 2 Overexpression of RBMS3 promoted cell cycle arrest and apoptosis in breast cancer cells
一致。在潜在靶基因中，细胞周期调控蛋白 p21 引 长（>8 h）（图 4A），RBMS3 敲降则将 p21 mRNA 的半
起关注。TIMER 数据库分析显示，RBMS3 与 p21 衰期从 4 h 缩短至 1.9 h（图 4B）；在 MDA⁃MB⁃231 细
mRNA表达呈正相关（图3B）；使用qRT⁃PCR检测收 胞中，RBMS3过表达将p21 mRNA 的半衰期从2.1 h
集的 34 例乳腺癌组织中 RBMS3 与 p21 的 mRNA 表 延长至4.2 h（图4C），RBMS3敲降将p21 mRNA的半
达水平，进一步证实 RBMS3 与 p21 mRNA 表达呈显 衰期从 2.2 h 缩短至 1.2 h（图 4D），提示 RBMS3 通过
著正相关（图3C）。在SUM⁃1315和MDA⁃MB⁃231细 增强p21 mRNA稳定性上调其表达。
胞中，RBMS3过表达显著上调p21的mRNA（图3D） RIP 实验结合 qRT⁃PCR 与琼脂糖凝胶电泳显
与蛋白水平（图 3F~H），而 RBMS3 敲降则显著下调 示：在免疫沉淀前的细胞裂解液对照 Input 组和
p21的mRNA（图3E）与蛋白水平（图3I~K）。移植瘤 RBMS3免疫沉淀物中可检测到p21 mRNA，IgG对照
组织 IHC 染色显示，相比对照组，RBMS3 过表达组 组中未检测到，且阴性对照β⁃actin不能与RBMS3结
Ki67阳性率降低，p21阳性率升高（图3L）。 合（图4E~H），证实RBMS3可直接结合p21 mRNA。

2.3 RBMS3 通过直接结合 p21 mRNA 的 3′⁃UTR 提 双荧光素酶报告基因实验用于确定 RBMS3 是
高其稳定性 否可以结合 p21 mRNA 3′⁃UTR 中的富含 AU 元件。
RNA 稳定性实验显示：在 SUM⁃1315 细胞中， 如图 4I 所示，设计了 1 个携带完整 p21 3′⁃UTR 区域
RBMS3 过表达将 p21 mRNA 的半衰期（原 4 h）延 或 ARE 突变区域的 pGL3 报告基因。转染含 p21