Page 68 - 南京医科大学自然版
P. 68
第45卷第12期
·1750 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年12月
无血清DMEM细胞培养基中,去除下层脂肪和结缔 检验分析组间差异。P < 0.05为差异有统计学意义。
组织,倒掉 DMEM 后将皮肤组织剪成碎片,放入含
2 结 果
有胶原酶的酶解液中37 ℃孵育2 h,将解离组织通过
70 mm过滤器过滤出单个细胞。PBS清洗,300 r/min 2.1 银屑病样小鼠血清中25(OH)D3、1,25(OH) 2D3
离心5 min后,细胞使用DMEM完全培养基重悬,加 含量及皮损中VDR mRNA表达情况
入细胞因子刺激封闭液,37 ℃孵育4 h后,流式细胞 连续 5 d 涂抹 IMQ 于小鼠背部造模后,与对照
术检测CD3 CD4 IL⁃17A T细胞的比例。 组小鼠皮肤相比,IMQ 组皮肤出现特征性银屑病样
+
+
+
1.3 统计学方法 皮损,即明显的红斑、鳞屑和增厚(图 2A)。检测两
使用 GraphPad Prism 10 软件进行作图和统计 组小鼠血清中 25(OH)D3、1,25(OH) 2D3含量发现,
分析。各组数据以均数±标准差(x ± s)表示,两组间 IMQ 组这两个指标的含量显著降低(P < 0.001,图
比较采用两独立样本 t 检验,多组间比较采用单因 2B、C),且皮损中 VDR mRNA 表达显著低于对照组
素方差分析(one⁃way ANOVA),若ANOVA结果显示 (P < 0.01,图2D)。以上结果表明,银屑病样小鼠中
显著性差异(P < 0.05),进一步使用 Tukey多重比较 VD代谢被抑制。
A Control IMQ B C D
50 *** 60 *** 2.0 **
D (ng/mL) 40 2D3 40 (based on GAPDH) 1.5
(OH) 3 30 1,(OH) (pg/mL) 20 Relative VDR mRNA 1.0
20
0.5
10
25
0 25 0 expression 0
Control IMQ Control IMQ Control IMQ
A:Photographs of skin lesions in the IMQ psoriasis model and control group. B,C:The levels of 25(OH)D3 (B)and 1,25(OH) 2D3 (C)in mouse
**
serum were detected by ELISA. D:Expression levels of VDR in mouse skin lesions was detected by RT⁃PCR. P < 0.01 and *** P < 0.001(n=6).
图2 银屑病样皮炎小鼠血清中25(OH)D3、1,25(OH)D3含量及皮损中VDR的mRNA表达情况
2
Figure 2 Serum levels of 25(OH)D3,1,25(OH)D3 and mRNA expression of VDR in mouse psoriatic dermatitis like lesions
2
2.2 NB⁃UVB照射对银屑病样皮炎及血清25(OH)D3、 子蛋白含量显著降低(P < 0.001,图4E~H)。进一步
1,25(OH)D3和皮损中VDR mRNA表达的影响 分析小鼠皮损中分泌IL⁃17A炎症因子的T细胞比例
2
+
+
IMQ 造模联合 NB⁃UVB 照射治疗后,相比 IMQ 发现,与对照组相比,IMQ 组 CD3 CD4 T 细胞中分
组,IMQ+NB⁃UVB组小鼠背部皮损红斑、鳞屑和皮肤 泌 IL⁃17A 细胞因子的比例显著升高(P < 0.001);
增厚显著减少,表明NB⁃UVB照射可显著缓解银屑病 IMQ+NB⁃UVB 组 CD3 CD4 IL⁃17A T 细胞比例相比
+
+
+
样皮损(图3A)。进一步检测发现IMQ+NB⁃UVB组小 IMQ 组显著降低(P < 0.001,图 4I、J)。以上结果表
鼠血清中25(OH)D3、1,25(OH) 2D3含量相比IMQ 组 明NB⁃UVB照射可显著缓解银屑病样小鼠的皮肤炎
明显上升(P < 0.01,图 3B、C),皮损中 VDR mRNA 症和降低Th17细胞的比例。
表达也显著上调(P < 0.05,图 3D)。该结果表明, 2.4 抑制VD代谢通路CYP27A1对NB⁃UVB照射治
NB⁃UVB 照射可显著上调银屑病样小鼠内源性 VD 疗银屑病样小鼠的影响
代谢。 为进一步验证NB⁃UVB对银屑病样炎症的缓解
2.3 NB⁃UVB 照射对银屑病样小鼠皮肤炎症以及 作用是否通过促进 VD 代谢介导,小鼠在 IMQ 造模
Th17细胞比例的影响 联合NB⁃UVB 照射治疗前,使用CYP27A1特异性抑
相比对照组,IMQ 组小鼠皮损中银屑病特征性 制剂 Dafadine⁃A 预处理。Dafadine⁃A 预处理后,
炎症因子IL⁃17A、IL⁃23、TNF⁃α和IL⁃1β mRNA 表达 IMQ+NB⁃UVB 组对银屑病样皮损的缓解作用显著
显著上调(P < 0.001);而IMQ+NB⁃UVB 组炎症因子 减弱,皮损出现鳞屑和增厚(图 5A);皮损中 CD3 +
mRNA表达均显著降低(P < 0.01,图4A~D)。同样, CD4 IL⁃17A T细胞比例相比IMQ+NB⁃UVB组显著
+
+
IMQ 组炎症因子蛋白含量相比对照组显著上升 回升(P < 0.001,图 5B、C);小鼠血清中 25(OH)D3、
(P < 0.001),相比IMQ组,IMQ+NB⁃UVB组的炎症因 1,25(OH) 2D3 含量和皮损中 VDR 表达明显低于

