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第45卷第12期
               ·1750 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2025年12月


              无血清DMEM细胞培养基中,去除下层脂肪和结缔                           检验分析组间差异。P < 0.05为差异有统计学意义。
              组织,倒掉 DMEM 后将皮肤组织剪成碎片,放入含
                                                                2  结 果
              有胶原酶的酶解液中37 ℃孵育2 h,将解离组织通过
              70 mm过滤器过滤出单个细胞。PBS清洗,300 r/min                   2.1  银屑病样小鼠血清中25(OH)D3、1,25(OH) 2D3
              离心5 min后,细胞使用DMEM完全培养基重悬,加                        含量及皮损中VDR mRNA表达情况
              入细胞因子刺激封闭液,37 ℃孵育4 h后,流式细胞                             连续 5 d 涂抹 IMQ 于小鼠背部造模后,与对照
              术检测CD3 CD4 IL⁃17A T细胞的比例。                         组小鼠皮肤相比,IMQ 组皮肤出现特征性银屑病样
                                    +
                             +
                        +
              1.3  统计学方法                                        皮损,即明显的红斑、鳞屑和增厚(图 2A)。检测两
                  使用 GraphPad Prism 10 软件进行作图和统计                组小鼠血清中 25(OH)D3、1,25(OH) 2D3含量发现,
              分析。各组数据以均数±标准差(x ± s)表示,两组间                       IMQ 组这两个指标的含量显著降低(P < 0.001,图
              比较采用两独立样本 t 检验,多组间比较采用单因                          2B、C),且皮损中 VDR mRNA 表达显著低于对照组
              素方差分析(one⁃way ANOVA),若ANOVA结果显示                  (P < 0.01,图2D)。以上结果表明,银屑病样小鼠中
              显著性差异(P < 0.05),进一步使用 Tukey多重比较                   VD代谢被抑制。


               A      Control         IMQ       B                   C                   D
                                                    50      ***         60      ***            2.0     **
                                                    D (ng/mL)  40       2D3  40               (based on GAPDH)  1.5
                                                    (OH) 3 30           1,(OH) (pg/mL)  20  Relative VDR mRNA  1.0
                                                    20
                                                                                               0.5
                                                    10
                                                    25
                                                     0                  25  0                 expression  0
                                                        Control  IMQ        Control  IMQ           Control  IMQ
                 A:Photographs of skin lesions in the IMQ psoriasis model and control group. B,C:The levels of 25(OH)D3 (B)and 1,25(OH) 2D3 (C)in mouse
                                                                                   **
              serum were detected by ELISA. D:Expression levels of VDR in mouse skin lesions was detected by RT⁃PCR. P < 0.01 and  *** P < 0.001(n=6).
                         图2 银屑病样皮炎小鼠血清中25(OH)D3、1,25(OH)D3含量及皮损中VDR的mRNA表达情况
                                                                   2
               Figure 2 Serum levels of 25(OH)D3,1,25(OH)D3 and mRNA expression of VDR in mouse psoriatic dermatitis like lesions
                                                    2
              2.2 NB⁃UVB照射对银屑病样皮炎及血清25(OH)D3、                   子蛋白含量显著降低(P < 0.001,图4E~H)。进一步
              1,25(OH)D3和皮损中VDR mRNA表达的影响                       分析小鼠皮损中分泌IL⁃17A炎症因子的T细胞比例
                       2
                                                                                              +
                                                                                                   +
                  IMQ 造模联合 NB⁃UVB 照射治疗后,相比 IMQ                  发现,与对照组相比,IMQ 组 CD3 CD4 T 细胞中分
              组,IMQ+NB⁃UVB组小鼠背部皮损红斑、鳞屑和皮肤                       泌 IL⁃17A 细胞因子的比例显著升高(P < 0.001);
              增厚显著减少,表明NB⁃UVB照射可显著缓解银屑病                         IMQ+NB⁃UVB 组 CD3 CD4 IL⁃17A T 细胞比例相比
                                                                                               +
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              样皮损(图3A)。进一步检测发现IMQ+NB⁃UVB组小                      IMQ 组显著降低(P < 0.001,图 4I、J)。以上结果表
              鼠血清中25(OH)D3、1,25(OH) 2D3含量相比IMQ 组                明NB⁃UVB照射可显著缓解银屑病样小鼠的皮肤炎
              明显上升(P < 0.01,图 3B、C),皮损中 VDR mRNA                症和降低Th17细胞的比例。
              表达也显著上调(P < 0.05,图 3D)。该结果表明,                     2.4  抑制VD代谢通路CYP27A1对NB⁃UVB照射治

              NB⁃UVB 照射可显著上调银屑病样小鼠内源性 VD                        疗银屑病样小鼠的影响
              代谢。                                                    为进一步验证NB⁃UVB对银屑病样炎症的缓解

              2.3  NB⁃UVB 照射对银屑病样小鼠皮肤炎症以及                       作用是否通过促进 VD 代谢介导,小鼠在 IMQ 造模
              Th17细胞比例的影响                                       联合NB⁃UVB 照射治疗前,使用CYP27A1特异性抑
                  相比对照组,IMQ 组小鼠皮损中银屑病特征性                        制剂 Dafadine⁃A 预处理。Dafadine⁃A 预处理后,
              炎症因子IL⁃17A、IL⁃23、TNF⁃α和IL⁃1β mRNA 表达              IMQ+NB⁃UVB 组对银屑病样皮损的缓解作用显著
              显著上调(P < 0.001);而IMQ+NB⁃UVB 组炎症因子                 减弱,皮损出现鳞屑和增厚(图 5A);皮损中 CD3                    +
              mRNA表达均显著降低(P < 0.01,图4A~D)。同样,                   CD4 IL⁃17A T细胞比例相比IMQ+NB⁃UVB组显著
                                                                            +
                                                                    +
              IMQ 组炎症因子蛋白含量相比对照组显著上升                            回升(P < 0.001,图 5B、C);小鼠血清中 25(OH)D3、
             (P < 0.001),相比IMQ组,IMQ+NB⁃UVB组的炎症因                 1,25(OH) 2D3 含量和皮损中 VDR 表达明显低于
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