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第45卷第12期 胡 枫，周 煜，李辛瑜，等. NB⁃UVB通过促进维生素D代谢缓解银屑病样皮炎的作用及机制研究［J］.
2025年12月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（12）：1747-1755 ·1749 ·

实时荧光定量 PCR 仪（ABI StepOne Plus，ABI 公司， 图1为NB⁃UVB照射治疗银屑病小鼠模型的流程图。
美国），SC1B 型 UVB 治疗仪（16 mW/cm ）（Sigma 公 小鼠使用 Dafadine⁃A 抑制 CYP27A1 酶活性后
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司，美国），流式细胞仪（Beckman Cytoflex S，Beckman 进行银屑病造模及照光，小鼠分组如下：对照组、
公司，美国），多功能酶标仪（Spetra Max iD3，Molecular IMQ 组、IMQ+NB⁃UVB 组（造模前 1 d 小鼠尾静脉注
Devices 公司，美国）；逆转录试剂盒（TSK301S）、实 射 IMQ）、IMQ+NB⁃UVB+Dafadine⁃A 组（造模前 1 d
时荧光定量PCR试剂（TSQ0101）、引物合成（北京擎 小鼠尾静脉注射Dafadine⁃A 试剂10 mg/kg），造模和
科生物有限公司），小鼠 25（OH）D3 ELISA 试剂盒 照光处理如上，造模最后1 d进行拍照，每组6只。
（D751005⁃0096）、小鼠 1，25（OH） 2D3 ELISA 试剂盒 1.2.3 ELISA检测
（D751006⁃0096）（上海生工生物有限公司），小鼠白 银屑病小鼠造模完成后，麻醉小鼠，进行眼球

细胞介素（interleukin，IL）⁃17A ELISA试剂盒（SEKM⁃ 取血，室温放置 1 h 后 3 000 r/min 离心 5 min 取小鼠
0018）、小鼠IL⁃23 ELISA试剂盒（SEKM⁃0023）、小鼠 血清。使用小鼠 25（OH）D3 ELISA 试剂盒和小鼠
肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）⁃α ELISA试 1，25（OH） 2D3 ELISA试剂盒检测血清中两个指标的

剂盒（SEKM⁃0034）、小鼠IL⁃1β ELISA试剂盒（SEKM⁃ 含量。取小鼠皮损，称重后匀浆研磨，1 000 r/min离
0002）（北 京 Solarbio 公 司）；APC ⁃ CD3 流 式 抗 体 心 2 min 取上清，检测皮损中IL⁃17A、IL⁃23、TNF⁃α、

（100235）、FITC⁃CD4流式抗体（100509）、PE⁃IL⁃17A IL⁃1β炎症因子的含量。以上 ELISA 指标检测严格
流式抗体（506903）（北京Biolegend公司）。 按照试剂盒说明书进行相应操作，每个检测孔设置
1.2 方法 两个复孔，于波长 450 nm 处测吸光度值，根据试剂
1.2.1 银屑病样小鼠模型建立 盒标准曲线测算出每个指标的样品浓度。
C57BL/6 小鼠剔除背部毛发，裸露皮肤面积为 1.2.4 RT⁃PCR检测小鼠皮损处VDR及炎症因子的
2 cm×2 cm。将 62.5 mg 5% IMQ 乳膏或对照剂凡士 mRNA表达
林均匀涂抹在小鼠暴露的皮肤上，连续涂抹 5 d，实 采用 Trizol 一步法提取小鼠皮损总 RNA，测定
验起始日期记为第0天，在第5天对小鼠采取异氟烷 RNA浓度。用逆转录试剂盒，按照说明书将RNA逆
麻醉，拍照记录小鼠皮损情况后进行眼球取血，迅速 转录为 cDNA。以 GAPDH 为内参，配制 20 mL 反应
取皮损进行提取RNA和流式细胞术的检测。 体系，扩增程序为：95 ℃ 1 min；95 ℃ 10 s、60 ℃ 20 s，
1.2.2 NB⁃UVB照射治疗银屑病小鼠模型的构建 40 个循环；最后进行熔解曲线分析。以 2 -ΔΔCT 计算
为了确定 NB⁃UVB 照射的最小红斑剂量，按照 样品中目的基因的表达量。引物序列见表1。
公式：辐照剂量（mJ/cm ）=辐照强度（mW/cm ）×辐照
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表1 目的基因的RT⁃PCR引物序列
时间（s），可计算出辐照剂量，本研究选取300、400、
Table 1 RT⁃PCR primer sequences of target genes
500 mJ/cm 的照射剂量。照射开始前，使用异氟烷
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Gene Primer sequence（5′→3′）
麻醉小鼠，去除小鼠背部毛发露出皮肤后，遮盖除
VDR R：TACACCCCCTCACTGGACAT
背部以外的其他皮肤，使照射光源位于小鼠背部
F：AGCGCAACATGATCACCTCA
皮肤上方约 2 cm 的距离照射。24 h 后观察小鼠背 IL⁃17A R：CTCAGACTACCTCAACCGTTCC
部皮肤情况，由于引起皮肤可见轻度红斑及脱屑的 F：CATGTGGTGGTCCAGCTTTCC
NB⁃UVB 辐照剂量为 400 mJ/cm ，本研究将初始剂 IL⁃23 R：CACCTCCCTACTAGGACTCAGC
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［12］ 2 F：TGGGCATCTGTTGGGTCT
量定为最小红斑量的 70% ，即 280 mJ/cm 。参考
文献［13］，在进行小鼠银屑病造模同时每隔1 d照射 TNF⁃α R：GCCACCACGCTCTTCTGTCT
NB⁃UVB 1次，共给予两次，第2次增加40 mJ/cm 。小 F：ACTCCAGCTGCTCCTCCACTT
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IL⁃1β R：ATAACCTGCTGGTGTGTGACGTT
鼠第1次IMQ处理后第2天开始接受NB⁃UVB处理，
F：AAGGCCACAGGTATTTTGTCGTT
GAPDH R：CCCTTAAGAGGGATGCTGCC
F：TACGGCCAAATCCGTTCACA
D0 D1 D2 D3 D4 D5
IMQ IMQ+NB⁃UVB IMQ IMQ+NB⁃UVB IMQ Mice sacraficed
图1 NB⁃UVB照射治疗银屑病小鼠模型流程图 1.2.5 流式细胞术检测皮损中分泌 IL⁃17A 炎症因
Figure 1 Flow chart of NB ⁃ UVB irradiation therapy for 子的T细胞比例
psoriasis mouse model 处死小鼠后立刻取小鼠皮损组织样本，浸泡入