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第45卷第2期 韦 伟，宋文鹏，吕 宁，等. 羟基积雪草苷和依克多因脂质体的制备及其功效研究［J］.
2025年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（2）：165-172，184 ·167 ·

24 h；24 h后，每孔加入含20 μg/mL脂多糖的无血清 以MC与EC的包封率、载药量为评价指标，考查
DMEM培养基，构建炎症模型；按照MC、EC、MC：EC 不同磷胆比、药脂比对脂质体质量的影响，磷胆比为
质量比 1∶9、1∶14、1∶19 分成 5 个组，每组设立低、 A因素，药脂比为B因素，按表1内计划进行制备。
中、高（20、100、200 μg/mL）3 个浓度梯度给药，其中
的20、100、200为MC与EC两种物质浓度之和。同时 表1 制备实验考查因素
Table 1 Preparation of experimental investigation factors
设置空白组和阳性组，继续培养 24 h 后，按照试剂
盒说明书步骤，测定各孔培养基上层清液中 NO、 Level A B
TNF⁃α浓度。 1 3∶1 1∶10
2 5∶1 1∶20
1.2.3 屏障修复活性检测
3 7∶1 1∶30
将 HaCaT 细胞按照 5 ×10 的密度接种于 24 孔
5
板中，37 ℃、5%CO2的细胞培养箱内培养24 h；24 h后 1.2.6 透析法测定脂质体包封率及载药量
每孔按照MC、EC、MC∶EC（1∶9）、MC∶EC（1∶14）、MC∶ 本研究使用透析法分离脂质体和游离药物，精密
EC（1∶19）分成5 个组，每组设立低、中、高（20、100、 量取pH=7.4的PBS缓冲液150 mL作为透析介质，选
200 μg/mL）3 个浓度梯度进行给药，其中的20、100、 择分子量8 KD~14 KD的透析袋，吸取2 mL的MC⁃EC
200 为MC与EC两种物质浓度之和。同时设置空白 脂质体于透析袋中，室温、磁力搅拌（400 r/min）下透
组，继续培养24 h后，按照试剂盒说明书步骤，测定各 析。在前期预实验中发现，游离MC在3 h可被透析
孔培养基上层清液中FLG蛋白、AQP⁃3蛋白的浓度。 完全，游离 EC 在 2 h 可透析完全，本实验选择在 3 h
1.2.4 高效液相色谱法测定脂质体溶液中 MC 与 后吸取透析袋内液体1 mL，加入等体积甲醇混匀后
EC的含量及方法学考察 在 1.2.4 的色谱条件下分别测定其中 MC 和 EC 的含
MC检测条件：35 ℃；色谱柱C18 （250 mm×4.6 mm× 量计为m1，同时测定未透析前脂质体中MC和EC的
5 μm）；流速 1 mL/min；进样量 10 μL；检测波长 含量计为 m。加入的磷脂和固醇的重量计为 M，分
205 nm；流动相A相为乙腈；B相为2 mmol/L β⁃环糊 别计算包封率、及载药量。包封率=m1/m×100%；载
精溶液；等度洗脱条件为0~30 min，A与B两者体积 药量=m1/（m+M）×100%。
比24∶76。 1.2.7 脂质体的体外透皮实验
EC检测条件：30 ℃；色谱柱C18 （250 mm×4.6 mm× 使用Franz立式扩散池，接收池体积8 mL，扩散
5 μm）；流速 0.8 mL/min；进样量 10 μL；检测波 面积为 3.14 cm ，扩散池体积 1 mL。扩散条件为水
2
长 210 nm；流动相 A 相为 pH=3 的磷酸盐缓冲液 浴温度 32 ℃，转速 300 r/min，恒温搅拌。将猪皮清
（40 mmol/L磷酸二氢钠⁃10 mmol/L 1⁃庚烷磺酸钠）； 洗干净后裁成合适大小，夹在扩散池和接收池中
B相为甲醇；梯度洗脱条件为0~5 min，A与B两者体 间，使角质层朝向扩散池方向。接收池中添加8 mL
积比 95∶5；6~10 min，A 与 B 两者体积比 55∶45；10~ 生理盐水为接收液，扩散池中分别加入 MC ⁃ EC 水
15 min，A与B两者体积比70∶30。 溶液、MC⁃EC脂质体溶液各1 mL。在第1、2、4、6、8、
配制 5、10、50、100、200、500 μg/mL 的 MC、EC 10、12、24 h分别从接收池中取8 mL接收液，后立即
标准溶液，在上述色谱条件下，测得峰面积和 MC、 添加等温等体积的生理盐水进入接收池 ［22］ ，使用高
EC 浓度的关系，以 MC、EC 浓度为横坐标（X），峰面 效液相色谱法，测定其中EC含量，统计24 h累积透
积为纵坐标（Y），获得X对Y的回归方程及相关系数 过量Qn，计算公式为：
［21］
r；进行专属性、精密度及准确度的方法学验证 。 （C + C + … + C ） × V
Q = 1 2 n
1.2.5 薄膜分散法制备脂质体 n A
精密称取定量的磷脂和胆固醇，溶于 10 mL 三 其中：Cn 为各时间点取样后的 EC 质量浓度
氯甲烷中，使用旋转蒸发仪在真空条件下去除有机 （μg/mL）；A为扩散面积（cm ）；V为各时间点固定取
2
溶剂，旋蒸60 min，在圆底烧瓶内部形成均匀的脂质 样体积（mL）。
薄膜。加入 5 mL 含有 MC 和 EC 的 PBS 溶液，水合 1.3 统计学方法
40 min，超声60 s，过0.45 μm滤膜，可得MC⁃EC脂质 使用 SPSS22 进行统计学分析，所有数据均为
体。使用马尔文粒径仪测定其粒径、电位；TEM 电 3 次平行实验算数的平均值±标准差（x ± s），采用单
镜下观察并拍摄制备的脂质体颗粒。 因素方差分析比较各组间差异，LSD⁃t 检验用于组