Page 22 - 南京医科大学自然版

第45卷第2期
·162 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年2月

A Heatmap B D WT ANXA5⁃KO
WT vs ANXA5⁃KO
12
No.sig ANXA5 35 kDa
Up
ANXA5
-2 10 ACSL4 Down
-1 ACSL4
-0 70 kDa
-1
（P adjust） 6 β⁃actin 42 kDa
-2 8
Relative ACSL4 level 2.0
-lg 4 *
2 1.5
1.0
0
-20 -10 0 10 20 30 0.5
log2FC
0
C
WT ANXA5⁃KO
4 *
ANXA5⁃KO
G
3
+Vector
+ANXA5
WT⁃1 WT⁃2 WT⁃3 Acsl4 mRNA 2 ANXA5 35 kDa
ANXA5⁃KO1 ANXA5⁃KO3 1 ACSL4
ANXA5⁃KO2
0
WT ANXA5⁃KO 70 kDa
E β⁃actin 42 kDa
F
WT ANXA5⁃KO 150 ** ** H
（%） 1.5 *
RSL3： RSL3： level
Cell viability
0 μmol/L 0 μmol/L 100 1.0
1 μmol/L 1 μmol/L 50 Relative ACSL4 0.5
2 μmol/L 2 μmol/L
0 0
4 μmol/L 4 μmol/L RSL3： - + + Vector ANXA5
0 10 3 10 4 10 5 10 6 0 10 3 10 4 10 5 10 6 ANXA5： - - +
C11⁃BODIPY
A：Heatmap of WT and ANXA5⁃KO samples. B：Analysis of differentially expressed genes by the volcano plot. C：RT⁃qPCR for Acsl4 mRNA. D：West⁃
ern blot analysis for ASCL4 and ANXA5 protein levels. E：FACS analysis for lipid⁃ROS stained by C11⁃BODIPY. F：ANXA5 expression rescued the
**
*
resistance to RSL3⁃induced ferroptosis. G，H：The negative regulation of ACSL4 by ANXA5 detected by Western blot. P < 0.05 and P < 0.01（n=3）.
图3 ANXA5负调控ACSL4水平参与黑色素瘤细胞铁死亡敏感性的调节
Figure 3 ANXA5 negatively regulated ACSL4 levels involved in the sensitivity regulation of ferroptosis

2.4 ANXA5是靶向铁死亡治疗黑色素瘤的潜在靶点 黑色素瘤细胞 A375 对 RSL3 诱导铁死亡的易感性
为了进一步验证 ANXA5 对黑色素瘤细胞铁死 （图4H）。这些结果表明ANXA5可能成为铁死亡治
亡敏感性的调控作用，以小鼠黑色素瘤 B16F1 与 疗黑色素瘤的潜在靶点。
B16F10 为研究对象进行比较。通过 Western blot 分
3 讨 论
析，相比 B16F10，B16F1 中 ANXA5 表达水平较低，
而 ACSL4 水平较高，与上述 ANXA5 负调节 ACSL4 肿瘤细胞对凋亡的内在性、获得性抵抗使得抗
的结果一致（图4A~C）。接着在RSL3诱导铁死亡发 癌药物的治疗效果受限，耐药性是肿瘤治疗的主要
生过程中，B16F1 细胞膜破损，LDH 释放量增加（图 限制因素，而利用其他形式的非凋亡性细胞死亡则
4D），并且在低剂量 0.5 μmol/L RSL3 诱导下其细胞 为抗肿瘤提供了新的治疗策略。铁死亡是近些年

存活率已大幅度降低（图4E），表明B16F1比B16F10 发现的一种新的细胞程序性死亡模式，是铁依赖性
具有更强的铁死亡易感性，与ANXA5表达水平负相 的并以细胞内活性氧堆积为特征的非凋亡形式的
关。进一步在人黑色素瘤细胞A375中采用RNAi敲 细胞死亡。铁成瘾性、脂质代谢异常及其活性氧累
减ANXA5进行验证，结果显示：ANXA5 siRNA 能有 积在恶性肿瘤细胞与正常细胞之间存在差异，这些
效敲低内源性 ANXA5 水平（图 4F、G），从而增强了 差异也是铁死亡的关键调控因素，使得肿瘤细胞对