Page 23 - 南京医科大学自然版

第45卷第2期 王嘉慧，李璐琪，张 悦，等. 膜联蛋白ANXA5调节黑色素瘤细胞铁死亡及其机制研究［J］.
2025年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（2）：157-164 ·163 ·

A B ** C
1.5 1.2
*
ANXA5/β⁃actin ACSL4/β⁃actin
B16F10 B16F1 1.0 0.8
ANXA5 35 kDa
ACSL4 70 kDa 0.5 0.4
β⁃actin
42 kDa
0 0
B16F10 B16F1 B16F10 B16F1
D E
150 B16F10
B16F10
（OD450） 1.2 B16F1 * ** * ** （%） 100 ** * * B16F1
0.9
LDH release 0.6 Cell viabllity 50 *

0.3

0 0 0 1 2 3 4
1 2 3 4 5 0 0.5 1 2 4 RSL3（μmol/L）
RSL3（μmol/L）
NC siRNA
F G * H 1.2 * siANXA5#1
ANXA5 siRNA ** （%） 0.9 * siANXA5#2

NC 1.0 *
#1 #2 ANXA5/Actin Ratio 1.5 0.6 *
ANXA5 35 kDa 0.5 Cell viability 0.3
β⁃actin 42 kDa
0 0
NC siRNA siANXA5 siANXA5
0 2 4
RSL3（μmol/L）
A-C：Western blot analysis for ANXA5 protein levels. D：The LDH release induced by RSL3 in B16F1 and B16F10 cells. E：CCK⁃8 assays for
B16F1 and B16F10 treated with RSL3. F，G：Validation of ANXA5 knockdown in A375 cells by Western blot. H：CCK⁃8 assay for A375 cells transfected
*
**
with siRANXA5. P < 0.05 and P < 0.01（n=3）.
图4 黑色素瘤细胞中ANXA5水平与铁死亡敏感性呈负相关
Figure 4 ANXA5 levels in melanoma cells was negatively correlated with ferroptosis sensitivity
铁死亡更敏感 ［10］ 。不同肿瘤细胞系对铁死亡的敏 细胞对铁死亡的敏感性。研究表明，转录共激活因
感性和作用机制均不同，本研究发现ANXA5在黑色 子YAP介导TFR和ACSL4基因的转录，减弱YAP能
素瘤细胞中高表达，通过细胞铁死亡模型说明 抑制铁死亡 ［13］ 。此外YAP 能与ANXA2相互作用结
ANXA5 增强黑色素瘤细胞对铁死亡的抵抗性。有 合到细胞膜上，抑制 ANXA2 则促进 YAP 从膜上释
报道研究 ANXA5 治疗神经性疾病的疗效可能与缓 放出来，成为具有转录活性的 YAP 入核上调 ACSL4
解神经细胞的铁死亡相关 ［11］ ，但在肿瘤研究中，尚 mRNA 水平，表现出铁死亡易感性 ［14］ 。ANXA5 与
未见 ANXA5 调节肿瘤细胞铁死亡的相关报道。本 ANXA2作为膜联蛋白家族成员，在结构功能上有着
研究发现 ANXA5 调节黑色素瘤细胞铁死亡的敏感 众多相似，提示了 ANXA5 也有可能负调节 YAP 的
性和耐受性，这对探究ANXA5调节黑色素瘤细胞铁 激活，从而负调控ACSL4表达。此外，Kan等 ［15］ 报道
死亡的作用机制具有重要临床指导意义。 了 PPARδ介导 ACSL4 表达的调控机制，而 ANXA1
铁死亡的发生需过氧化多不饱和脂肪的理论已被 能调节 PPARδ信号通路激活 ［16］ 。这些报道为探究
广泛接受，磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine， ANXA5 调节 ACSL4 表达的分子机制提供了思路和
PE）是铁死亡过程中氧化的主要底物，而促铁死亡 依据，具体作用机制还有待进一步研究。
基因ACSL4作用调节脂质组成的关键酶，参与形成 目前，分子靶向癌症治疗仍面临耐药性和少数
富含长链不饱和脂肪酸的膜脂（如 PE） 。抑制 受益患者的挑战，靶向治疗增敏的探索备受关注。
［12］
ACSL4 表达能促使细胞对铁死亡脱敏，本研究中敲 维莫非尼（Vemurafenib）是一种用于治疗恶性黑色
除 ANXA5 能显著上调 ACSL4 表达，增强黑色素瘤 素瘤的药物，Tsoi 等 ［17］ 研究发现铁死亡诱导剂Eras⁃