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第45卷第6期 高彩月，曹丹丹，倪思琦，等. Akt1上调FBXO6表达对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响［J］.
2025年6月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（6）：777-785 ·781 ·

A B 3 ** C D 3 **
pIRES2⁃EGFP pIRES2⁃FBXO6 FBXO6 2 pIRES2⁃EGFP pIRES2⁃FBXO6 FBXO6 2

Relative 1 Relative 1
FBXO6 487 bp mRNA levels FBXO6 33 kDa protein levels
GAPDH 203 bp β⁃actin 42 kDa
0 0
pIRES2⁃FBXO6
pIRES2⁃EGFP pIRES2⁃EGFP
pIRES2⁃FBXO6

E F G
2.5 ** pIRES2⁃EGFP pIRES2⁃FBXO6 80
**
nm） 2.0 （%） 60
（450 1.5 ×100 Relative cell area/ total area 40
1.0
D
0.5 20
0 0
pIRES2⁃FBXO6
pIRES2⁃FBXO6
pIRES2⁃EGFP pIRES2⁃EGFP

U87 cells were transfected with pIRES2⁃EGFP or pIRES2⁃FBXO6 for 48 h. A-D：The mRNA and protein levels of FBXO6 were detected by RT⁃
PCR（A：electrophoretic bands of RT⁃PCR；B：statistical chart）and Western blot（C：electrophoretic bands of Western blot；D：statistical chart）. E-G：
The levels of cell proliferation and invasion were detected by CCK⁃ 8（E）and Transwell（F：representative images，scale bar=200 μm；G：statistical
**
chart）. P < 0.01（n=3）.
图2 过表达FBXO6对U87细胞增殖和侵袭的影响
Figure 2 Effects of overexpression of FBXO6 on proliferation and invasion of U87 cells

分别转染 U87 细胞 48 h，检测 FBXO6 基因的表达。 酸化，但是对其本身蛋白的表达均没有明显影响
发现 siFBXO6⁃2 可显著降低 FBXO6 的 mRNA（图 （图 4A、B）。此外，用 Perifosine 处理 U87 细胞后，
3A、B）和蛋白（图3C、D）表达，故后续采用siFBXO6⁃2 FBXO6 的 mRNA 和蛋白表达均明显降低，而 U0126
进行实验，并简称为 siFBXO6。将 siNC 和 siFBXO6 和 SP600125 对 FBXO6 的表达均无显著影响（图
分别转染U87细胞48 h，行CCK⁃8检测发现，与siNC 4C~F）。提示，Akt1 信号分子可正向调控胶质瘤细
转染组相比，转染siFBXO6后U87细胞的增殖能力明 胞中FBXO6基因的表达。
显下降（图 3E）。之后将 siNC 和 siFBXO6 分别转染 2.5 Akt1通过上调FBXO6促进胶质瘤细胞的增殖
U87细胞48 h，行Transwell实验检测发现，与siNC转 和侵袭
染组相比，转染siFBXO6后U87细胞的侵袭能力明显 为了进一步检查 Akt1 对 U87 细胞增殖和侵袭
降低（图3F、G）。上述实验结果表明，沉默FBXO6基 的调控作用，使用Akt1抑制剂Perifosine处理U87细
因可有效抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力。 胞，同时设DMSO溶剂对照组，行CCK⁃8和Transwell
2.4 抑制ERK1/2、JNK和Akt1对胶质瘤细胞FBXO6 实验检测细胞的增殖和侵袭水平。结果表明，与
表达的影响 DMSO 组相比，Perifosine 可明显抑制 U87 细胞的增
为了进一步探究胶质瘤细胞中 FBXO6 基因表 殖（图 5A）和侵袭（图 5B、C），提示 Akt1 信号分子的
达的上游调控机制，分别使用 DMSO（溶剂对照）、 活化可增强胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力。接着，
U0126（ERK1/2 抑制剂）、SP600125（JNK 抑制剂）和 将 pIRES2⁃EGFP 和 pIRES2⁃FBXO6 转染 U87 细胞，
Perifosine（Akt1 抑制剂）处理 U87 细胞，1 h 和 3 h 后 再 使 用 DMSO 和 Perifosine 处 理 U87 细 胞 ，检 测
收取RNA和蛋白样，检测ERK1/2、JNK和Akt1的表 FBXO6的mRNA和蛋白水平。结果发现，与DMSO+
达和磷酸化水平以及 FBXO6 的 mRNA 和蛋白表达 pIRES2⁃EGFP组相比，用Perifosine处理转染pIRES2⁃

量。结果表明，与 DMSO 组相比，U0126、SP600125 EGFP 后的 U87 细胞，其 FBXO6 的 mRNA 和蛋白水
和 Perifosine 可分别抑制 ERK1/2、JNK 和 Akt1 的磷 平（图6A~D）、细胞增殖（图6E）和侵袭（图6F、G）均