Page 153 - 《南京医科大学学报（自然科学版）》2025年第9期

第45卷第9期 辛 亮，张 岭，杨克俭. 人偏肺病毒疫苗研究进展［J］.
2025年9月 南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（9）：1362-1369 ·1365 ·

突变体 v3⁃B 为基础，通过加入更多 IP⁃DS 和其他突 单克隆抗体MPE8的亲和程度未受影响，而且主要诱
［15］
变提高免疫原性（表 1，序号 6~10）。比较突变体免 导融合前特异性抗体 。综上，具有稳定Pre结构的
疫小鼠的血清中和活性发现，含 3 个二硫键的突变 DS⁃CavEs2将有助于hMPV疫苗的研发。
体诱导高水平中和抗体，且无脯氨酸突变体诱导的 hMPV F0 的激活仅需蛋白酶切割 1 次，而 RSV
［34］
抗体水平更高，v3⁃BΔ12DS454诱导的小鼠中和抗体 F0要被切割2次。Bakkers等 认为类似RSV的2次
水平最高，具有成为候选疫苗的潜力 ［32-33］ 。 切割可能促进 hMPV F0 的激活，研究模拟分析 F0，
设计稳定的hMPV Pre F方案时，参考RSV的经 确定第2切割位点。结果表明，2次切割获得的稳定
验，首先，阻断弗林样蛋白酶有效切割，并增强蛋白 hMPV Pre F 三聚体能够诱导高水平抗体和交叉中
表达。其次，添加二硫键、填充空腔和引入脯氨酸 和抗体反应，几乎完全保护 hMPV 对棉鼠的攻击。
固定转折；此外，通过改变某些位点氨基酸的极性 高度稳定的双切割 hMPV Pre F 三聚体成为有吸引
增强稳定性。基于以上策略设计单点和多点突变 力的候选疫苗。
（表 2），比较表达量、聚集状态、热稳定性和免疫原 VLP 由病毒结构蛋白组成，保留真实病毒空间
性等，获得最佳突变体DS⁃CavEs2，其与针对Pre F的 构象。虽然VLP缺失基因组，但可有效诱导体液和

表1 突变体构建过程
Table 1 The construction process of mutants

Confor⁃ Disulfide bond mutation
No. Mutants Other mutations
mation Intrapromoter Interpromoter
1 v1⁃B PreF A113C/A339C - T160F，I177L
2 v2⁃B PreF A113C/A339C A120C/Q426C T160F，I177L
3 v3⁃B PreF A140C/A147C V84C/A249C -
4 v4⁃A/B * PostF 60C/A63C ** 182C/K188C ** A140C，A147C，K450C，S470C **
5 v5 PostF 60C/A63C 182C/K188C A140C，A147C
6 v3⁃BΔ12 PreF A140C/A147C V84C/A249C Modify the F2⁃F1 link region，89⁃112 GSGGSG，185P
7 v3⁃BΔ12DS365 PreF A140C/A147C V84C/A249C， Modify the F2⁃F1 link region，89⁃112 GSGGSG，185P
T365C/Q455C
8 v3⁃BΔ12DS454 PreF A140C/A147C V84C/A249C Modify the F2⁃F1 link region，89⁃112 GSGGSG，185P
D454C/V458C
9 v3⁃BΔ12DS365 3P PreF A140C/A147C V84C/A249C Modify the F2⁃F1 link region，89⁃112 GSGGSG，185P，with
T365C/Q455C additional mutations E131P，R163P，and A459P
10 v3⁃BΔ12DS454 3P PreF A140C/A147C V84C/A249C Modify the F2⁃F1 link region，89⁃112 GSGGSG，185P，with
D454C/V458C additional mutations E131P，R163P，and A459P
*：v4⁃A was derived from A1 NL/1/00，and v4⁃B was derived from B2 CAN98⁃75，respectively. **：Original design of v4 involved A140C⁃A147C，
A63C⁃K188C，and K450C⁃S470C；cryo⁃EM defined model delineated 60C⁃A63C and 182C⁃K188C（with A140C，A147C，K450C，S470C）.

表2 DS⁃CavEs2构建过程
Table 2 The construction process of DS⁃CavEs2

Name Mutation Advantage
BaseCon A185P/H368N/Q100R/S101R -
DSx2 Base Con+T127C/N153C/T365C/V463C Expression level was increased，and thermostability was enhanced
DS⁃CavEs DSx2+L219K/V231I Expression level was higher than DSx2，and Tm was higher than BaseCon
MM⁃1H DS⁃CavEs+L110C/N322C/N368H/ Expression level was decreased

MM⁃4H MM⁃1H +A140C/A147 Expression level was close to MM⁃1H，and Tm was increased
DS⁃CavEs2 MM⁃4H +E453Q Expression level was increased，with 1 L FreeStyle 293 ⁃ F cells expressing
15.7 mg of Pre F，and Tm increased to 71.8 ℃