Page 26 - 《南京医科大学学报（自然科学版）》2025年第9期

第45卷第9期
·1238 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年9月

circRNA是封闭的内源性非编码RNA（non⁃cod⁃ 与驱动恶性转化的多个分子事件 ［21］ 和耐药 ［22］ 。敲
ing RNA，ncRNA），是共价封闭的连续环，没有 5′帽 低 hnRNPA1 后，耐药细胞的增殖和迁移能力下降，
结构和3′聚腺苷化的尾部，由于其结构的原因，它比 联合奥希替尼后，细胞的增殖和迁移能力进一步下
线性RNA更稳定。长期以来，circRNA被认为是基因 降。接着通过 RNA 测序寻找下游靶基因，并通过
组中异常 RNA 剪接或噪声的低丰度副产物 ［18］ 。然 qRT⁃PCR、Western blot 分析表明，敲低circ_0003633
而，越来越多的证据表明circRNA在癌症的发生、发 后，ALDOC 的 mRNA 和蛋白表达显著下降。敲低
展以及耐药中发挥重要作用 ［19］ 。本研究针对课题 hnRNPA1后，ALDOC的mRNA和蛋白表达也显著下
组前期测序结果筛选出在耐药细胞中高表达的 降，说明 ALDOC 受 circ_0003633 和 hnRNPA1 的共
circ_0003633 进行进一步的生物学功能和机制研 同调节。ALDOC是醛醇酶家族成员之一，近年来研
究。在奥希替尼耐药细胞中敲低circ_0003633的表 究表明ALDOC的异常表达和易位促进了肿瘤的进展
达可以增加耐药细胞对奥希替尼的敏感性，同时抑 和相关信号转导 。在耐药细胞中敲低ALDOC后发
［23］
制耐药细胞的增殖和迁移。 现细胞的增殖和迁移能力下降，联合奥希替尼后，细
为了进一步探究circ_0003633对肺腺癌细胞奥 胞的增殖和迁移能力进一步下降。最后，将RNA测
希替尼耐药的潜在分子机制，设计了生物素标记的 序结果进行GO功能富集分析，发现与PI3K/AKT 信
circ_0003633 探针，通过 RNA pulldown 实验联合质 号通路密切相关，已有多个报道证明，circRNA 可
谱 发 现 了 能 够 与 circ_0003633 相 互 作 用 的 蛋 白 以通过激活 PI3K/AKT 信号通路促使肿瘤耐药的
hnRNPA1，并且 circ_0003633 与 hnRNPA1 结合并不 发生 ［11- 12］ ，进一步 Western blot 实验验证发现敲低
影响 hnRNPA1 的表达 ［20］ 。hnRNPA1 是一种来自异 circ_0003633 后 p⁃PI3K、p⁃AKT 的表达水平下降，联
质核核糖核蛋白（hnRNP）家族的RNA结合蛋白，是 合奥希替尼后 p⁃PI3K、p⁃AKT 的表达水平进一步下
该家族中最丰富和最普遍表达的成员，已被证明参 降。说明 circ_0003633 可能通过激活 PI3K/AKT 信

A
Metabolic pathways
Count
PI3K⁃AKT signalin pathway 10
20
Complement and coagulation cascades
30
Staphylococcus aureus infection 40 osir
50
Chemical carcinogenesis 60
Mwtabolism of xenobiotics by cytochrome P450 70
Drug metabolism⁃other enzymes ⁃lg（P.value）
Drug metabolism⁃cytochrome P450 2
3
ECM⁃receptor interaction
4
Hypertrophic cardiomyopathy（HCM） 5
6
Cholesterol metabolism
Glycolysis/gluconeogenesis
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25
Gene ratio
B HCC827/OR C H1975/OR
si⁃circ_0003633⁃2#
si⁃circ_0003633⁃2#
si⁃circ_0003633⁃1# si⁃circ_0003633⁃1# si⁃circ_0003633⁃1# si⁃circ_0003633⁃1#
si⁃circ_0003633⁃2#
si⁃circ_0003633⁃2#
si⁃NC si⁃NC si⁃NC si⁃NC
Osimertinib - - - + + + Osimertinib - - - + + +
p⁃PI3K 85 kDa p⁃PI3K 85 kDa
PI3K 85 kDa PI3K 85 kDa
p⁃AKT 60 kDa p⁃AKT 60 kDa
AKT 60 kDa AKT 60 kDa
β⁃actin 42 kDa β⁃actin 42 kDa
A：GO functional enrichment analysis. B：Western blot analysis of PI3K/AKT signaling pathway alterations.
图8 circ_0003633通过PI3K/AKT信号通路发挥作用
Figure 8 circ_0003633 exerted its effect through the PI3K/AKT signaling pathway