Page 8 - 《南京医科大学学报》2026年第1期
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第46卷第1期
               · 2  ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2026年1月


             ［Key words］ cancer⁃associated fibroblast；THBS2；macrophage polarization
                                                                               ［J Nanjing Med Univ，2026，46（01）：1⁃13］





                  结直肠癌（colorectal cancer，CRC）作为全球高                   血小板反应蛋白⁃2（thrombospondin⁃2，THBS2，
              负担恶性肿瘤，其发病率和死亡率分别位于全球恶                            TSP2）作为血小板反应蛋白家族（thrombospondin
                                    ［1］
              性肿瘤的第 3 位和第 2 位 。我国 CRC 发病率也呈                     family，THBS）的核心成员，是由 470 kDa 亚基通过
              持续攀升态势，现已成为仅次于肺癌的第二大高发                            二硫键连接形成的同源三聚体分泌型糖蛋白                        ［16］ 。
              肿瘤 。目前临床治疗仍以手术切除联合辅助化疗                            通过整合素（α3β1、α4β1）和 CD36 受体调控 ECM
                  ［2］
              为主要方案，但转移性 CRC 患者的 5 年生存率仍不                       动态重构、血管生成开关及肿瘤免疫编辑等病理进

              足20%  ［3-4］ 。因此，系统阐明CRC发生发展的分子机                   程 ［17］ 。最新研究表明，THBS2 可激活 FAK/Src 通路
              制并探索新型治疗靶点，已成为当前肿瘤研究领域                            促进侵袭    ［18］ ，但其调控TME重塑的分子机制仍存在
              的重要课题。                                            研究盲区。本研究结合生物信息学分析与功能实
                  肿瘤微环境（tumor microenvironment，TME）由            验，首次揭示 CAF 通过分泌 THBS2 激活 PI3K/AKT
              免疫细胞、肿瘤相关成纤维细胞、内皮细胞等，以及                           通路诱导巨噬细胞 M2 极化，为靶向 CAF⁃TAM 轴的
              细胞外基质（extracellular matrix，ECM）、细胞因子、代            CRC治疗提供新策略。
              谢产物等非细胞成分共同构成的动态生态系统                      ［5-6］ 。
                                                                1 材料和方法
              肿瘤细胞与 TME 密切相关，不断相互作用                 ［7-8］ 。而
              在 TME 中，肿瘤相关成纤维细胞（cancer⁃associated               1.1  材料
              fibroblast，CAF）作为关键效应细胞发挥核心调控功                    1.1.1  试剂
                ［9］
              能 。CAF 通过分泌生长因子［转化生长因子⁃β                               THP⁃1 细胞（中国科学院上海细胞生物学研究
             （transforming growth factor⁃beta，TGF⁃β）、肝细胞生       所）；原代正常成纤维细胞（normal fibroblast，NF）、CAF
              长因子（hepatocyte growth factor，HGF）］、趋化因子          （本实验室分离纯化）；胎牛血清（Gibco公司，美国）；
             （C⁃X⁃C 基元）配体 12（C⁃X⁃C motif chemokine ligand       RPMI 1640培养基、DMEM培养基（上海中乔新舟生
              12，CXCL12）及基质金属蛋白酶⁃2/9（matrix metallo⁃            物科技有限公司）；RNAiso Plus 试剂（TaKaRa Bio 公
              proteinase⁃2/9，MMP2/9）等因子促进肿瘤增殖、ECM               司，日本）；逆转录试剂盒和 SYBR Green Mix 试
              重塑及免疫逃逸        ［10］ 。因此，针对CAF功能异质性及               剂（南京诺唯赞生物科技公司）；佛波酯（phorbol⁃12⁃
              其分泌因子调控的干预策略，已成为提升现有治疗                            myristate⁃13⁃acetate，PMA）、脂多糖（lipopolysaccharide，
              方案疗效的关键研究方向。                                      LPS）（Sigma公司，美国）；白细胞介素⁃4（interleukin⁃
                  肿瘤相关巨噬细胞（tumor⁃associated macrophage，         4，IL⁃4）（苏州近岸蛋白质科技股份有限公司）；
              TAM）是 TME 中数量最丰富的免疫细胞群，起源于                        人 THBS2重组蛋白（R&D Systems公司，美国）；Lipo⁃
              循环单核细胞或局部组织驻留的巨噬细胞                     ［11］ 。在    Gene TM  2000 Star Transfection Reagent（US EVER⁃
              肿瘤进展中，TAM通过表型可塑性展现出功能异质                           BRIGHT公司，美国）；8 μm孔径Transwell小室（Corning
              性，通常极化为促肿瘤的M2表型               ［12］ ，成为肿瘤进展        公司，美国）；三标四色多重荧光染色试剂盒、Polymer⁃
              的关键协同者。研究表明，TAM通过分泌生长因子，                          HRP 羊抗兔二抗试剂盒（湖南艾方生物科技有限

              如 血 管 内 皮 生 长 因 子（vascular endothelial growth     公司）；BCA 蛋白浓度检测试剂盒、RIPA 裂解液、蛋
              factor，VEGF）、表 皮 生 长 因 子（epidermal growth         白酶抑制剂苯甲基磺酰氟（PMSF）、磷酸酶抑制剂
              factor，EGF），表达精氨酸酶⁃1（arginase⁃1，ARG1）、           （PI）（上海碧云天生物技术股份有限公司）；ECL
              程序性死亡配体⁃1（programmed death⁃ligand 1，PD⁃L1）        化学发光试剂（南京普诺恩生物科技公司）；人
              以及基质重塑酶（matrix metalloproteinase，MMP），介           THBS2 ELISA试剂盒（上海酶联生物科技有限公司）。
              导血管生成、T细胞抑制及肿瘤细胞转移                  ［13］ ，其高浸     1.2  方法
              润与患者不良预后显著相关             ［14-15］ ，这使得靶向 TAM       1.2.1 细胞培养
              的极化重编程或特异性耗竭策略成为肿瘤免疫治                                  THP⁃1在含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养
              疗的新兴方向。                                           基中培养；原代 CAF 与 NF 在含有 10%胎牛血清的
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