Page 13 - 《南京医科大学学报》2026年第1期
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第46卷第1期          徐 甲，厉梦琪，袁小琴. 肿瘤相关成纤维细胞分泌THBS2通过PI3K/AKT通路驱动巨噬
                  2026年1月         细胞M2极化促进结直肠癌进展［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（1）：1-13                    · 7  ·


                T 细胞（图 3G，r=-0.077，P < 0.05）及树突状细胞                型的重要介质。
               （图 3H，r=-0.238，P < 0.001）呈负相关（图 3），提示                  综上，CAF 通过分泌 THBS2 发挥双重调控作
                其可能通过调控特定免疫亚群影响微环境稳态。                             用，既可诱导巨噬细胞向M2抗炎表型极化，又能增
                上述数据表明，CAF 来源的 THBS2 与 M2 型巨噬细                    强其迁移浸润能力。但其具体分子机制还需要实
                胞浸润显著相关，但其是否通过直接调控巨噬细                             验进一步阐明。
                胞极化或与其他基质因子协同作用，仍需进一步                             2.4  THBS2通过激活PI3K/AKT通路促进巨噬细胞
                分析。                                               M2极化

                2.3  THBS2促进巨噬细胞极化与迁移                                 基于文献报道的 PI3K/AKT 信号通路在巨噬细
                    通过功能实验解析 THBS2 对巨噬细胞的作                        胞极化中的作用        ［19］ ，构建 M2 极化模型进行验证。
                用。首先构建 THP⁃1 巨噬细胞极化模型，分别采用                        IL⁃4诱导THP⁃1细胞M2极化后，Western blot分析显
                CAF⁃CM 和 NF⁃CM 处理 PMA 诱导的 M0 巨噬细胞。                示，与未极化（M0）细胞相比，M2 标志物 ARG1 表达
                qRT⁃PCR结果显示，相比NF⁃CM组，CAF⁃CM处理显                    上调至2.1倍（P < 0.05），同时p⁃PI3K和p⁃AKT 水平

                著抑制 M1 型标志物表达（IL⁃1β下降 71.2%，P <                   分别升高 1.6 倍（P < 0.05）和 1.8 倍（P < 0.05），而总
                0.05；IL⁃6 下降 91.1%，P < 0.01；TNF⁃α下降 68.3%，        PI3K 以及 AKT 蛋白量无显著变化（图 6A），提示
                P < 0.05），同时促进 M2 型标志物表达（IL⁃10 上调                 PI3K/AKT信号通路激活是巨噬细胞M2极化的重要
                9.6 倍 ，P < 0.01；CD206 上 调 12.5 倍 ，P < 0.001；      分子机制。
                ARG1 上调 2.7 倍，P < 0.05，图 4A）。Transwell 迁移             为进一步阐明 CAF 对 PI3K/AKT 通路的调控作
                实验进一步表明，CAF⁃CM 处理的巨噬细胞迁移能                         用，采用 CAF⁃CM 和 NF⁃CM 处理 M0 巨噬细胞。结
                力增强至对照组的 1.3 倍（P < 0.05，图 4B），提示                  果 显 示 ，相 比 NF⁃CM 组 ，CAF⁃CM 处 理 后 ARG1
                CAF 分泌物质具有驱动巨噬细胞向M2表型极化并                          表达升高2.5倍（P < 0.05），同时p⁃PI3K和p⁃AKT水
                增强其迁移活性的功能。                                       平分别增加 1.8 倍和 1.9 倍（P < 0.05，图 6B）。重组
                    为明确THBS2的关键作用，采用重组人源THBS2                     THBS2蛋白直接刺激M0细胞，发现其诱导ARG1表
                蛋白直接刺激 M0 巨噬细胞。qRT⁃PCR 检测显示，                      达是IL⁃4刺激组的1.5倍（P < 0.05），且p⁃PI3K以及
                THBS2 处理显著抑制 M1 型标志物表达，与空白对                       p⁃AKT 激活水平较 IL⁃4 组提高 1.2 倍和 1.3 倍（P <
                照组相比，IL⁃1β表达下降 40.8%（P < 0.05），IL⁃6 下             0.05，图6C），提示THBS2可能是介导该信号通路激
                降 65.5%（P < 0.05），TNF⁃α下降 53.1%（P < 0.05）；        活的关键效应分子之一。
                同时协同 IL⁃4 增强 M2 型标志物表达，IL⁃10 表达上                      接着通过 THBS2 敲低 CAF 的条件培养基（si⁃
                调 2.2 倍（P < 0.05），CD206 上调 1.5 倍（P < 0.01）；       2⁃CM、si⁃3⁃CM）进行拯救实验。结果显示，与对照
                ARG1上调3.2倍（P < 0.01，图3C）。迁移实验证实，                  siRNA组相比，THBS2敲低组的条件培养基降低巨噬
                THBS2 刺激使巨噬细胞穿膜数增加至对照组的                           细胞中ARG1表达（si⁃2⁃CM下降59.9%，si⁃3⁃CM下降
                1.3 倍（P < 0.05，图 4D），初步验证 THBS2 促进巨噬              20.2%），以及 p⁃PI3K（si⁃2⁃CM 下降 45.8%，si⁃3⁃CM
                细胞M2极化和迁移的作用。                                     下降 22.3%）和 p⁃AKT（si⁃2⁃CM 下降 50.2%，si⁃3⁃CM
                    通过 siRNA 敲低 CAF 中 THBS2 表达（敲低效                下降 47%）水平（P < 0.05，图 6D），提示 CAF 通过分
                率>58%，P < 0.05，图5A、B）进行功能拯救实验。结                   泌THBS2调控PI3K/AKT通路激活。
                果显示，与对照 si⁃nc⁃CM 相比，THBS2 敲低条件培
                                                                  3 讨    论
                养基（si⁃2⁃CM、si⁃3⁃CM）处理的巨噬细胞中，M2 型
                标志物表达显著下调（si⁃2⁃CM组：IL⁃10下降63.8%，                      TME 作为调控恶性肿瘤发生发展的关键生态
                P < 0.05；CD206 下降 62.9%，P < 0.01；ARG1 下降          系统，其动态互作网络在肿瘤免疫逃逸及转移中的
                26.3%，P < 0.05；si⁃3⁃CM 组 ：IL⁃10 下 降 60.2% ，       生物学机制已成为研究热点。现有研究表明，TME
                P < 0.05；CD206下降74%，P < 0.01；ARG1下降9.6%，          通过细胞互作（如Notch⁃Jagged信号）或分泌TGF⁃β、
                P < 0.05，图5C）。迁移实验进一步显示，THBS2敲低                   IL⁃6等可溶性因子，诱导CAF、TAM等基质细胞发生
                条件培养基抑制了巨噬细胞迁移能力，si⁃2⁃CM组减                        促癌表型转化       ［20］ 。本研究发现 THBS2 作为 CAF 分
                少 25.8%，si⁃3⁃CM 组减少 27.5%（P < 0.05，图 5D），         泌的关键效应分子，可通过激活 PI3K/AKT 通路在
                提示THBS2是CAF调控巨噬细胞M2极化和迁移表                         TME免疫调控中发挥重要作用。
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