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第46卷第10期
               ·1480 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2026年10月


              miR⁃18a expression in RBMECs after EA treatment. Bioinformatics prediction identified TSP⁃1 as a direct target of miR⁃18a. Western
              blotting confirmed that transfection with miR⁃18a mimic significantly downregulated TSP⁃1 expression in RBMECs. Dual luciferase
              reporter assays validated TSP⁃1 as a direct target of miR⁃18a. Rescue experiments demonstrated that inhibiting miR⁃18a reversed
              EA’s aforementioned protective effects on RBMECs. Conclusion：EA exerts anti⁃apoptotic and pro⁃angiogenic effects by modulating
              the miR⁃18a/TSP⁃1 signalling axis，thereby mitigating ischaemic brain injury. This axis may represent a potential therapeutic target for
              post⁃stroke neuroprotection.
             ［Key words］ ellagic acid；ischemic stroke；angiogenesis；miR⁃18a；thrombospondin⁃1
                                                                          ［J Nanjing Med Univ，2026，46（10）：1479⁃1491］





                  缺血性脑卒中（ischemic stroke，IS）是一种高病               保护潜力    ［17-18］ 。然而，EA能否直接调控 BMEC 的血
              死率、高致残率且易复发的脑血管疾病，给全球医                            管新生功能，参与 IS 后的血管修复，以及是否通过
              疗卫生系统带来沉重负担 。静脉溶栓或机械取栓                            miRNA 介导的信号通路发挥作用，尚未见报道。因
                                     ［1］
              为急性期的治疗策略，但由于治疗时间窗狭窄及缺血/                          此，本研究提出以下科学假设：EA 可能通过上调
              再灌注损伤风险，临床应用受到了极大的限制                      ［2-3］ 。  miR⁃18a 表达，靶向抑制下游靶基因 Thbs1 的转录翻
              IS 的重要病理生理过程涉及神经⁃血管单元破坏，导                         译，解除 TSP⁃1 对血管新生的抑制作用，进而改善
              致血脑屏障破坏、微循环受损和神经元死亡，其中                            BMEC 功能、减轻缺血性脑损伤。为验证这一假设，

              脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial          本研究采用氧糖剥夺（oxygen⁃glucose deprivation，
                                                      ［4］
              cell，BMEC）功能障碍和死亡起着核心作用 。因                        OGD）细胞模型和大鼠MCAO模型，系统探讨 EA 对
              此，促进缺血区域血管新生能有效恢复脑血流、促                            缺血性脑损伤的保护作用及 miR⁃18a/TSP⁃1 轴的
              进神经修复，对改善卒中后脑功能恢复具有重要意                            调控机制，为 IS 的治疗提供新的实验依据和潜在
                                              ［5］
              义，被认为具有广阔的临床应用前景 。                                靶点。
                  微小RNA（microRNA，miRNA）是一类广泛存在
                                                                1 材料和方法
              于真核生物中的非编码小分子RNA，通过调节转录
              后基因的表达，在多种疾病的发病机制中具有重要                            1.1  材料
              作用 。其中，miR⁃18a已被证实广泛参与血管发育                             永生化大鼠脑微血管内皮细胞系 iCell⁃0032a
                  ［6］
              及多种血管相关病理过程            ［7-11］ 。研究表明，miR⁃18a       购自 iCell Bioscience（上海）有限公司。成年雄性
                                             ［8］
              的异常表达参与了脑动静脉畸形 、肺动脉高压                             Sprague⁃Dawley 大鼠（8~10 周龄，220~250 g）购自维
             （pulmonary arterial hypertension，PAH） 的发病过         通利华（北京）公司，许可证号 SYXK（蒙）2020⁃
                                                ［11］
              程。张红利等       ［12］ 发现在 IS 人群中 miR⁃18a 表达降          0003。
              低，且与不良预后相关；而在蛛网膜下腔出血（sub⁃                              EA（纯度：99.75%）购自美国 MCE 有限公司。
              arachnoid hemorrhage，SAH）模型中 miR⁃18a 过表达          一步法 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒（红色荧光）、
              有利于神经功能恢复 。生物信息学分析及已有研                            BeyoClick EdU⁃488 细胞增殖检测试剂盒、Annexin
                                 ［9］
                                                                         TM
              究证明，血小板反应蛋白1（thrombospondin⁃1，TSP⁃1）              V⁃FITC 细胞凋亡检测试剂盒购自上海碧云天生物
              作为一种强效的内源性血管新生抑制因子，能够抑                            有限公司；Lipofectamine 3000 转染试剂购自美国
                                                                                      TM
              制内皮细胞的迁移、增殖及管形成能力，其转录基                            赛默飞世尔科技公司；TSP⁃1 抗体、B 细胞淋巴瘤⁃2
              因Thbs1被预测为miR⁃18a的关键靶基因，该通路在                      蛋白（B⁃cell lymphoma 2，Bcl⁃2）抗体、Bcl⁃2 相关X蛋
              静脉畸形（venous malformation，VM）和糖尿病足中                白（Bcl⁃2⁃associated X protein，Bax）抗体、细胞增殖
              也得到了验证      ［13-14］ ，而在IS中尚未有报道。                  核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）抗
                  鞣花酸（ellagic acid，EA）是一种天然多酚，存在                体、细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）抗体、β⁃actin 抗体
              于多种水果和坚果中，具有抗氧化、抗炎和抗凋亡                            购自武汉三赢生物科技有限公司；HRP标记山羊抗
              作用  ［15-16］ 。研究显示，EA可减轻大鼠大脑中动脉闭                   兔/小鼠 IgG 二抗购自英国 Abcam 公司；ECL 化学发
              塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型中的      光底物购自安徽白鲨生物科技有限公司；miR⁃18a
              神经元凋亡和氧化应激，对脑缺血再灌注损伤具有                            mimic 及 antagomir、双荧光素酶报告系统由西安基
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