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第46卷第5期 卢森威，彭红红，施 超. 呼吸道合胞病毒（A/B亚型）人群抗体特征及影响因素研究进展［J］.
2026年5月 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（5）：771-779，784 ·775 ·

体这样的粗略指标难以准确反映保护效果；同时， 其依赖昂贵的成像设备和专业操作人员 。伪病毒
［45］
pre⁃F IgG 也无法区分不同亚型抗体的中和能力差 中和试验（pseudovirus neutralization assay，PsVNA）作
异。因此，引入 NAb 作为评价标准，可以解决上述 为一种新兴技术，利用重组伪病毒报告系统，具有
问题。NAb 是一种由 B 淋巴细胞分泌的免疫球蛋 高安全性、超高通量、快速及易于标准化的优势。
白，能阻止病毒与宿主细胞的结合、侵入细胞以及 然而，由于伪病毒所携带的包膜蛋白可能无法完全
病毒在细胞内的脱衣壳过程，从而有效抑制病毒感 模拟野生型病毒的所有构象表位，该方法有时会低
染。其主要作用机制是通过与病毒表面的特定抗 估实际抗体效价 ［46］ 。总体而言，目前尚无一种在检
原结合，阻止病毒与宿主细胞表面受体的相互作 测准确性和实际可操作性之间达到理想平衡的方
用。这种结合可以改变病毒的构象，使其无法正常 法，有待进一步研究和技术开发。
识别并结合到宿主细胞的受体上，从而阻止病毒进 目前，RSV 研究领域关于NAb 的研究已取得一
入细胞；除了直接阻止病毒与受体结合外，NAb 还 定进展。Wang 等 ［47］ 的研究表明，小鼠接种 Ad26.
可以通过空间位阻效应，物理上阻碍病毒与宿主细 RSV.preF疫苗后，无论是A亚型还是B亚型，都表现
胞的接触；对于包膜病毒，NAb 与病毒表面抗原结 出明显的剂量依赖性NAb反应，尤其是对已感染过
［43］
合后，可以激活补体系统，导致病毒裂解 。 RSV的小鼠，接种疫苗后产生的NAb水平更高；Cox
RSV 的 NAb 滴度检测目前主要依赖以下几种 等 ［48］ 则针对18~85岁成年人进行了不同剂量和配方

方法（表 1）：空斑减少中和试验（plaque reduction 的 RSV 疫苗接种实验，发现无论 18~59 岁成年人还
neutralization test，PRNT）作为传统方法，通过计数 是 60~85 岁老年人，在接种后的 12 个月内，NAb 水
病毒空斑形成来评估抗体中和能力，结果准确可 平在第1个月达到高峰，随后下降，但仍高于接种前
靠，被视为金标准。但其操作繁琐、耗时长（通常 水平，A 和 B 亚型抗体显示出相似的变化趋势。然
需 5~7 d），且结果判读主观性强，难以实现高通量 而，现有研究多集中于疫苗接种后的抗体应答，而
检测 ［44］ 。微量中和试验（microneutralization assay， 对自然感染后抗体的峰值水平、衰减速率及持续时
MN）与 PRNT 原理类似，通过在细胞培养板上观察 间的系统评估仍十分缺乏。这一现状主要源于以
细胞病变效应进行判断，可使用光学显微镜或免疫 下几方面挑战：首先，在方法学上，传统金标准
荧光检测。该方法通量较高、成本较低，但仍存在 PRNT法需在生物安全三级实验室操作活病毒，流程
结果判读主观和重复性有限的问题 。荧光灶减少 复杂、成本高昂，难以大规模应用；而其他替代检测方
［6］
［44］
中和试验（focus reduction neutralization test，FRNT） 法的灵敏度往往不足，可能影响数据的准确性 。其
基于免疫荧光技术，通过自动化成像系统定量荧光 次，在研究实施上，要对婴幼儿及老年高危人群开
灶数目，显著提高了检测的客观性、通量和速度。但 展长达数年的纵向研究，频繁采血面临严峻的伦理
表1 RSV中和抗体检测方法、原理及其优缺点
Table 1 RSV neutralizing antibody detection methods，principles and their advantages and disadvantages

Detection method Principle Advantage Disadvantage
Plaque reduction neutral⁃ The viral plaque forming units are re⁃ It is regarded as the gold stan⁃ The operation is cumbersome，
ization test（PRNT） duced by antibodies on the monolayer dard，with accurate and reli⁃ time ⁃ consuming（5 to 7 days），
of cells able results highly subjective and difficult to
handle at high throughput
Micro ⁃ neutralization test The inhibitory effect of antibodies on The throughput is higher than The result interpretation is sub⁃
（MN） cytopathic effects is observed under a that of PRNT，and the cost is jective，with average repeatability
microscope in microplates relatively lower and sensitivity
Fluorescence reduced neu⁃ The fluorescence foci formed by quan⁃ Strong objectivity，high throu⁃ Expensive fluorescence imaging
tralization test（FRNT） titative viral infection have decreased ghput and fast speed equipment is required and the

through automated imaging operation is complex
Pseudovirus neutralization Use replication⁃defective pseudovirus⁃ High security，huge through⁃ It may not be possible to fully
test（PsVNA） es carrying reporter genes put，fast speed，and easy stan⁃ simulate all conformational epit⁃
dardization opes of the wild⁃type virus