Page 24 - 南京医科大学自然科学版第1期

第41卷第1期
· 18 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年1月

将总蛋白 20 μg 样品加到 12%分离凝胶上并转膜； P < 0.05为差异有统计学意义。
TBST洗涤5 min，室温下5%脱脂奶粉溶液中封闭2 h；
2 结 果
TBST洗涤后，4 ℃下孵抗Geminin（1∶200）、抗HBO1
（1∶200）和抗 Cdt1（1∶200）一抗过夜；TBST 洗涤后， 2.1 Geminin在胶质瘤组织的表达情况
室温下将膜孵HRP 标记的二抗（1∶5 000）2 h。最后 从 GEPIA 数据库获得的结果表明，无论是低
ECL显色，LabWorks 灰度图像分析软件分析。所有 级别胶质瘤还是胶质母细胞瘤组织中 Geminin 的
实验独立重复3次。 表达均明显高于瘤旁正常脑组织（图 1A、B，P <

1.3 统计学方法 0.05）。同时本课题组利用 qRT⁃PCR 实验方法得出
应用SPSS 22.0和Graphpad 5.0软件对数据进行 的 结 果 显 示 ，20 例 新 鲜 胶 质 瘤 组 织 中 Geminin
统计学处理。其中计量资料以均数±标准差（x ± s） mRNA 的表达（1.30 ±0.22）明显高于瘤旁正常脑组
表示，实验数据的两组间比较行t检验，多组均数比 织（0.88±0.19），差异具有统计学意义（P < 0.05，图
较采用单因素方差分析，两两比较采用 SNK 检验。 1C）。

A 10 8 * B * C 2.0 *
Geminin相对表达水平 6 4 Geminin相对表达水平 6 4 Geminin mRNA相对表达水平 1.5

1.0

0.5

0 2 2 0 0.0
LGG 瘤旁组织 GBM 瘤旁组织 瘤旁组织 瘤组织
（n=518） （n=207） （n=163） （n=207） （n=20） （n=20）
A、B：GEPIA数据库分析结果显示，Geminin在低级别神经胶质瘤（LGG）和胶质母细胞瘤（GBM）中高表达；C：qRT⁃PCR结果显示，Geminin
mRNA在胶质瘤组织中表达增高，两组比较，P < 0.05。
*
图1 胶质瘤组织中Geminin的表达水平增高
Figure 1 High expression of Geminin in glioma tissues

2.2 Geminin基因沉默 1.5
qRT⁃PCR 检测基因沉默对 U251 细胞内 Gemi⁃
nin 基因表达的影响，结果显示，与 Control 组（1.01± 1.0
0.18）及 si⁃NC 组（0.96±0.08）相比，si⁃Geminin 组 Geminin mRNA相对表达水平
（0.18±0.05）中 Geminin mRNA 表达水平显著降低 0.5
（P < 0.05，图2）。 *
2.3 Geminin基因沉默对U251细胞增殖的影响 0.0
CCK⁃8 法检测 Geminin 基因沉默对 U251 细胞 Control组 si⁃NC组 si⁃Geminin组
si⁃Geminin 组细胞中 Geminin mRNA 表达水平降低，与对照组
的增殖的影响，结果显示，与 Control 组及 si⁃NC 组
（Control及si⁃NC）相比，P＜0.05，n=3。
*
相 比 ，si⁃Geminin 组 细 胞 存 活 率 显 著 降 低（P <
图 2 Geminin 基因沉默对 U251 细胞 Geminin mRNA 表达
0.05，图 3）。 水平的影响
2.4 Geminin 基因沉默对 U251 细胞迁移和侵袭的 Figure 2 Effect of Geminin gene silencing on Geminin
影响 mRNA expression in U251 cells
Transwell 实验结果显示，si⁃Geminin 组 U251 细
胞迁移数量［（70.33±5.51）个/视野］和侵袭数量 个/视野］相比均显著降低（均P < 0.05，图4）。

［（29.00±3.61）个/视野］与 Control 组［迁移（146.33± 2.5 Geminin 基因沉默对 U251 细胞内 HBO1、Cdt1
13.20）个/视野；侵袭（81.67±5.13）个/视野］及 si⁃NC 蛋白表达的影响
组［迁移（144.00±5.57）个/视野；侵袭（86.67±7.68） Western blot 实 验 检 测 Geminin 基 因 沉 默 对