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南京医科大学学报（自然科学版） 第41卷第1期
· 22 · Journal of Nanjing Medical University（Natural Sciences） 2021年1月

·基础研究·

microRNA⁃449a通过调控MDM4抑制神经母细胞瘤生长

程 涛，张 生，姚 远，张向宁，张爱辉，侯崇智 *
西安市儿童医院普外一科，陕西 西安 710002

［摘 要］ 目的：研究microRNA⁃449a（miR⁃449a）对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法：在BE（2）⁃C细
胞中过表达miR⁃449a后通过实时荧光定量PCR（quantitative real⁃time PCR，qPCR）分析基因表达水平的变化，MTT分析细胞活
力，克隆形成试验观察肿瘤细胞增殖能力，同时，采用microRNA靶标预测和功能注释数据库miRDB预测miR⁃449a潜在靶向基
因，对靶基因 MDM4 进行过表达和干扰表达后，Western blot 分析相关蛋白表达水平，流式细胞术分析细胞凋亡。结果：miR⁃
449a过表达抑制细胞增殖及克隆形成。经过软件预测和实验验证，证实MDM4为miR⁃449a的1个靶基因。另外干扰MDM4表
达后亦可以抑制细胞增殖和克隆形成。过表达MDM4可以抵消由转染miR⁃449a模拟物所引起的细胞凋亡和p53蛋白量的增
加。miR⁃449a可以促进BE（2）⁃C细胞凋亡，但是在稳定干扰p53表达的细胞株没有观察到这种效应。结论：miR⁃449a通过靶
向调控MDM4基因进而稳定p53蛋白从而促进肿瘤细胞凋亡，提示miR⁃449a可能作为神经母细胞瘤潜在治疗靶标之一。
［关键词］ miR⁃449a；神经母细胞瘤；MDM4；细胞凋亡
［中图分类号］ R739.43 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007⁃4368（2021）01⁃022⁃07
doi：10.7655/NYDXBNS20210105

MicroRNA⁃449a inhibits neuroblastoma by regulating MDM4
*
CHENG Tao，ZHANG Sheng，YAO Yuan，ZHANG Xiangning，ZHANG Aihui，HOU Chongzhi
Department of General Surgery，Xi ’an Children’s Hospital，Xi’an 710002，China

［Abstract］ Objective： To investigate the mechanisms underlying the effects of microRNA⁃ 449a（miR⁃449a）on proliferation and
suppression of neuroblastoma. Methods： After overexpressed miR⁃449a in BE（2）⁃C cells，the change of gene expression levels were
analyzed by quantitative real⁃time PCR（qPCR），cell viability was tested by MTT，and the proliferation efficiency of tumor cell was
observed by clone formation assay. Meanwhile，we also predicted potential target genes of miR⁃449a using miRDB，and manipulated
the level of MDM4 by overexpression or knockdown the expression of MDM4. Then，the expression of related proteins was analyzed by
Western blot and the apoptosis was detected by flow cytometry. Results： Overexpression of miR⁃449a inhibited cell proliferation and
colony formation，and promoted cell apoptosis. MDM4 was confirmed to be a target gene of miR⁃449a by using software prediction and
the experimental verification. In addition，knockdown of MDM4 expression inhibited cell proliferation and colony formation.
Overexpression of MDM4 neutralized the increases of apoptosis and p53 protein level induced by miR⁃449a. Furthermore，miR⁃449a
promoted apoptosis of BE（2）⁃C cells，but this effect was not observed in p53 knockdown cell line. Conclusion： miR⁃449a increases
p53 protein level by suppressing MDM4 to promote neuroblastoma cell apoptosis. This study implies miR⁃449a could be a potential
therapeutic target of neuroblastoma.
［Key words］ miR⁃449a；neuroblastoma；MDM4；cell apoptosis
［J Nanjing Med Univ，2021，41（01）：022⁃028］

神经母细胞瘤是儿童最常见的实体肿瘤。由于 经母细胞瘤是儿童主要的肿瘤相关致死原因 ［1-3］ 。神
现有针对神经母细胞瘤的治疗方法对于高风险神经 经母细胞瘤起源于神经嵴，通常易发于肾上腺髓质或
母细胞瘤患者的治愈率只有30%。因此，高风险的神 椎旁神经结，以颈部、胸部、腹部和骨盆肿块为特征。

［基金项目］ 陕西省重点研发计划项目（2018KW⁃062） 然而，神经母细胞瘤的临床表现高度不一致，可仅表
∗ 现为肿块而无症状，也可由于局部浸润或广泛转移而
通信作者（Corresponding author），E⁃mail： hczfx@126.com