Page 33 - 南京医科大学自然科学版第1期

第41卷第1期 程 涛，张 生，姚 远，等. microRNA⁃449a通过调控MDM4抑制神经母细胞瘤生长［J］.
2021年1月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（01）：022-028 · 27 ·

增殖的分子机制，我们将 miR⁃449a 模拟物转染 BE 定p53蛋白水平从而促进细胞凋亡。
（2）⁃C 细胞并通过流式细胞术检测细胞凋亡情况，
3 讨 论
通过免疫印迹法检测凋亡相关指标的变化。如图
5A、B 所示，miR⁃449a 显著增加 BE（2）⁃C 细胞凋亡， 已有研究表明，miR⁃449a作为肿瘤抑制子在多
凋亡率由（3.00±1.32）%增加至（38.20±2.78）%。miR 种肿瘤中阻止肿瘤细胞的细胞周期，包括肺癌、前
⁃449a 显著下调 MDM4 蛋白水平并上调 p53 蛋白水 列腺癌、胃癌及视网膜母细胞瘤 ［7-8，13-14］ 。除了对肿
平。p53上调导致细胞凋亡分子cleaved PARP 上调 瘤细胞细胞周期的调控，miR⁃449a也可通过其他机
（图5C）。为了进一步证明p53在此中的作用，我们 制对肿瘤细胞进行调控，如抑制细胞增殖和诱导细
构建 p53 低表达的稳定细胞株［shp53 BE（2）⁃C］并 胞凋亡。本研究结果表明，在神经母细胞瘤中miR⁃

用此细胞株进行上述实验，结果证明在 shp53 BE 449a 也可通过引起细胞凋亡和降低细胞增殖发挥
（2）⁃C 细胞中 miR⁃449a 不能促进细胞凋亡，凋亡率 肿瘤抑制作用。
由（3.33±1.20）%增加至（4.26±0.55）%，差异无统计 本文主要研究了 miR⁃449a 靶基因其中之一的
学意义。此外发现 miR⁃449a 并不能影响 MDM2 的 MDM4。首先通过经典的 miRNA 靶基因预测方法
蛋白水平。因此，miR⁃449a可能通过调控MDM4稳 预测 miR⁃449a 潜在靶基因。该方法基于种子区域

A BE（2）⁃C B 50 ***
对照组 miR⁃449a组 （ % ） 40
10 7 10 7
Q5⁃UL Q5⁃UR Q5⁃UL Q5⁃UR
10 6 0.1% 0.2% 10 6 0.7% 4.0% 凋亡率 30
20
10 5 10 5 10
0
10 4 10 4
miR⁃449a组
miR⁃449a组
10 3 10 3 对照组 对照组
10 2 Q5⁃LL Q5⁃LR 10 2 Q5⁃LL Q5⁃LR
98.5% 1.2% 59.3% 36.0% BE（2）⁃C shp53 BE（2）⁃C
10 1 10 1
1
2
3
4
4
6
5
1
5
6
3
2
10 10 10 10 10 10 10 7 10 10 10 10 10 10 10 7
shp53 BE（2）⁃C
对照组 miR⁃449a组
10 7 10 7
Q1⁃UL Q1⁃UR Q1⁃UL Q1⁃UR
10 6 0.4% 0.2% 10 6 0.0% 0.2%
10 5 10 5
10 4 10 4
PI 10 3 10 3
10 2 Q1⁃LL Q1⁃LR 10 2 Q1⁃LL Q1⁃LR
95.4% 4.0% 95.7% 4.0%
10 1 10 1
4
6
5
2
1
6
3
3
2
1
4
5
10 10 10 10 10 10 10 7 10 10 10 10 10 10 10 7
Annexin⁃V
C 对照组 D 对照组
对照组 miR⁃449a组 15 000 miR⁃449a组 对照组 miR⁃449a组 10 000 miR⁃449a组
MDM4 55 kDa 10 000 *** MDM4 55 kDa 8 000 ***
cleaved 蛋白表达量 *** cleaved 6 000
25 kDa *** 25 kDa 蛋白表达量
PARP 5 000 PARP 4 000 *** *
p53 53 kDa p53 53 kDa 2 000
0 0
cleaved PARP
MDM4 MDM2 MDM4 p53
GAPDH 36 kDa p53 GAPDH 36 kDa
MDM2 55 kDa cleaved PARP
A：BE（2）⁃C和shp53 BE（2）⁃C细胞转染miR⁃449a后流式细胞术检测细胞凋亡情况；B：各组细胞凋亡情况统计；C：BE（2）⁃C细胞转染miR⁃
449a 后通过免疫印迹法检测 MDM4、p53、MDM2 及 cleaved PARP 蛋白水平；D：shp53 BE（2）⁃C 细胞转染 miR⁃449a 后通过免疫印迹法检测
MDM4、p53及cleaved PARP蛋白水平。对照组：BE（2）⁃C细胞；miR⁃449a组：转染miR⁃449a模拟物。与对照组比较，P < 0.05， P < 0.001（n=3）。
*
***
图5 miR⁃449a抑制MDM4并促进p53蛋白稳定
Figure 5 miR⁃449a inhibits the level of MDM4 and promotes stability of p53