Page 32 - 南京医科大学自然科学版第1期

第41卷第1期
· 26 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年1月

细胞增殖能力的降低起到一定的恢复作用（图 （图 4E）。该结果提示 miR⁃449a 应该是通过调控
4A）。此外，在转染 miR⁃449a 模拟物的细胞中高表 MDM4进而对p53的蛋白水平进行调控。如图4F所
达 MDM4 可以抵消由转染 miR⁃449a 导致的细胞凋 示，过表达MDM4可以降低p53蛋白水平，但是蛋白
亡 增 加（细 胞 凋 亡 率 为 ：对 照 组 2.63% ± 1.02% ， 酶体抑制剂 MG132 处理可以部分阻止 p53 的降解。
MDM4 组 1.70% ± 0.50% ，miR ⁃ 449a 组 36.10% ± 因此我们认为MDM4 通过调控p53蛋白的稳定性而
1.68%，MDM4+miR⁃449a 组 6.13%±0.90%）以及 p53 非mRNA水平发挥作用。
蛋白水平的上升（图4B~D）。 2.5 miR⁃449a 通过调控 MDM4 稳定 p53 蛋白水平
接下来检测了 p53 的 mRNA 水平的变化，并且 从而促进细胞凋亡
观察到单独转染miR⁃449a并不影响p53 mRNA水平 为了进一步阐明 miR⁃449a 抑制神经母细胞瘤

A 对照组 B ###
1.0 MDM4组 40 ***
nm ） 0.8 ****** *** miR⁃449a组 （ % ） 30
（ 450 0.6 miR⁃449a+MDM4组 凋亡率 20
0.4
D
0.2
10
** *
0.0
0 h 24 h 48 h 72 h 0
miR⁃449a组
对照组 MDM4组 miR⁃449a+
MDM4组
C 对照组 MDM4组 miR⁃449a组 miR⁃449a+MDM4组
10 7 10 7 10 7 10 7
Q2⁃UL Q2⁃UR Q2⁃UL Q2⁃UR Q2⁃UL Q2⁃UR Q2⁃UL Q2⁃UR
10 6 0.0% 0.0% 10 6 0.0% 0.4% 10 6 0.0% 1.1% 10 6 0.0% 0.0%
10 5 10 5 10 5 10 5
PI 10 4 10 4 10 4 10 4
10 3 10 3 10 3 10 3
10 2 Q2⁃LL Q2⁃LR 10 2 Q2⁃LL Q2⁃LR 10 2 Q2⁃LL Q2⁃LR 10 2 Q2⁃LL Q2⁃LR
97.1% 2.9% 97.8% 1.8% 63.3% 35.6% 94.9% 5.1%
10 1 10 1 10 1 10 1
5
6
1
3
2
1
6
5
4
5
2
1
6
4
3
4
3
2
5
1
2
6
3
4
10 10 10 10 10 10 10 7.2 10 10 10 10 10 10 10 7.2 10 10 10 10 10 10 10 7.2 10 10 10 10 10 10 10 7.2
Annexin⁃V
D *** E 0.03
miR⁃449a+MDM4组
##
对照组 MDM4组 miR⁃449a组 p53蛋白表达量 3 2 mRNA相对表达量 0.02
##
p53 53 kDa 1 *** 0.01
0 p53 0.00
miR⁃449a组
对照组 MDM4组 miR⁃449a+
36 kDa 对照组 miR⁃449a组
GAPDH
MDM4组
F MDM4 - - + + ###
p53蛋白表达量 4 2
MG132 - + - + ***
p53 53 kDa 3
##
GAPDH 36 kDa 1 ***
0
对照组 MG132组 MDM4组 MDM4+
MG132组
A：BE（2）⁃C细胞转染miR⁃449a或/和MDM4过表达质粒后，CCK⁃8检测细胞增殖情况；B：各组细胞凋亡情况统计；C：流式细胞术检测细胞
凋亡情况；D：免疫印迹法检测p53蛋白水平；E：转染miR⁃449a后检测p53 mRNA水平的变化；F：MG132处理可以部分阻止p53的降解。对照
组：BE（2）⁃C 细胞；miR⁃449a 组：转染 miR⁃449a 模拟物；MDM4 组：转染 MDM4 过表达质粒；miR⁃449a+MDM4 组：同时转染 miR⁃449a 模拟物和
MDM4过表达质粒。与对照组比较，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001；与miR⁃449a+MDM4组比较，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
**
##
***
###
*
图4 过表达MDM4可以抵消由转染miR⁃449a所引起的细胞凋亡和p53蛋白量的增加
Figure 4 Overexpression MDM4 blocks the increase of cell apoptosis and the protein level of p53 induced by miR⁃449a
transfection