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第41卷第1期
               · 30  ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年1月


              alleviate liver injury by inhibiting the activation of STAT3 in the treatment of fatty liver.
             ［Key words］ urantide；atherosclerosis；fatty liver；STAT3；rat
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2021，41（01）：029⁃034］







                  动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种血脂               试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）；TIAN⁃
              异常及血管壁成分改变的慢性炎症病变 ，其脂质代                           Script cDNA 第一链合成试剂盒、SuperReal PreMix
                                                 ［1］
                                                         ［2］
              谢紊乱累及肝脏造成脂肪变性，近年来广受关注 。                           SYBR Green 试剂盒、DAPI 染液、FITC 标记二抗（北
              尾加压素Ⅱ（urotensin Ⅱ，UⅡ）是由 11 个氨基酸残                  京天根生化科技有限公司）。
              基组成的生长抑素样神经环肽，参与调节心血管、免                           1.2  方法
                                              ［3］
              疫、消化、泌尿等系统疾病的发生发展 。UⅡ主要通                          1.2.1 实验动物分组及处理
              过与其特异性G蛋白偶联受体UT结合构成UⅡ/UT                               30 只雄性 Wistar 大鼠适应性饲养 1 周［恒定温
                                           ［4］
              系统在多器官中发挥生物学作用 。有研究已证实，                           度（22±2）℃，相对湿度（50±10）%，正常摄食及饮
              UⅡ/UT系统与肝内炎症损伤存在密切联系                   ［5-6］ 。本   水］，按照随机数字表随机分成3组（每组10只）：正
              课题组前期研究发现，UⅡ/UT系统可通过C反应蛋                          常组、AS 组、Urantide 组。根据参考文献方法制备

              白（C⁃reactive protein，CRP）、单核趋化蛋白⁃1（mono⁃          AS 大鼠模型     ［13］ ：AS 组、Urantide 组饲以特制高脂饲
              cyte chemotactic protein⁃1，MCP⁃1）以及白细胞介素6         料（基础饲料 80.8%，胆固醇 3.5%，胆酸钠 0.5%，丙
             （interleukin⁃6，IL⁃6）参与AS大鼠体内炎症反应的发                 硫氧嘧啶 0.2%，猪油 10%，白糖 5%），并连续 3 d 给
              生 ［7-8］ ，同时诱导AS大鼠肝损伤，发生脂肪变性 ，其                    予每只大鼠腹腔注射VD3150 μg/（kg·d）。于第4周，
                                                       ［9］
              具体调控机制尚有待阐明。近年研究发现，信号转                            随机选取1只模型大鼠，进行血脂指标检测及病理学
              导与转录激活因子 3（signal transducer and activator        检测，以判断造模是否成功。模型复制成功后，Uran⁃
              of transcription 3，STAT3）可介导机体的炎症反应和              tide 组尾静脉注射 Urantide 30 μg/（kg·d），正常组和
              细胞增殖诱导 AS 的发生          ［10］ 。此外，STAT3 信号通         AS 组尾静脉注射等体积生理盐水，连续给药 2 周。
              路在非酒精性脂肪肝的发生发展过程中发挥关键                             大鼠禁食12 h后取材。分别称取体重及肝重，计算
              作用  ［11-12］ 。为进一步探究AS大鼠脂肪肝中UⅡ/UT                  肝系数（肝系数=肝重/体重×100%）。胸主动脉取
              系统与STAT3之间的关系，本研究采用UⅡ受体拮抗                         血，全自动生化分析仪检测大鼠血清中丙氨酸氨基
              剂Urantide阻断UⅡ/UT信号通路，观察了AS大鼠肝                     转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天门冬氨酸
              脏中STAT3的表达水平，初步探讨了UⅡ/UT系统对                        氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）的含
              STAT3的作用机制，借以深入阐明UⅡ/UT系统对AS                       量。本研究所有大鼠实验均严格遵循动物实验“3R”
              大鼠造成肝脂肪变性的反应机制。                                   原则，按照中华人民共和国国家标准《实验动物福利
                                                                伦理审查指南》（GB/T 27416⁃2014）执行。
              1  材料和方法
                                                                1.2.2 HE染色法
              1.1  材料                                                将大鼠胸主动脉、肝组织于 4%多聚甲醛固定
                  3 周龄雄性 SPF 级 Wistar 大鼠 30 只，体重 180~           后经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、石蜡包埋后
              200 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，                         制备石蜡切片，经二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化后，常
              实验动物使用许可证号：SCXK（京）⁃2016⁃0011。                     规HE染色，光镜下观察各组大鼠的病理学变化。
              Urantide（苏州强耀生物公司）；维生素D3 （VD3，哈尔                  1.2.3 RT⁃qPCR检测

              滨市华晟科技动物药品厂）；胆固醇、胆酸钠（Sigma                             TRIzol 法提取肝组织总 RNA，紫外分光光度计
              公司，美国）；丙硫氧嘧啶片（上海朝晖药业有限公                           进行定量，TIANScript cDNA第一链合成试剂盒合成
              司）；兔抗大鼠p⁃STAT3抗体（CST公司，美国）；兔抗                     cDNA，SuperReal PreMix SYBR Green 试剂盒分别检

              大鼠β⁃actin 抗体、HRP标记山羊抗兔二抗（Bioworld                 测 STAT3、β⁃actin mRNA的CT值，基因检测引物序列
              公司，美国）；TRIzol裂解液、RIPA蛋白裂解液、Brad⁃                  见表1，扩增条件：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，60 ℃ 34 s，
              ford 组织蛋白浓度测定试剂盒、超敏 ECL 化学发光                      40 个循环；做熔解曲线。以 STAT3 CT 值与β⁃actin
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