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第41卷第10期 刘 静，孔祥清. 银杏叶提取物对瓣膜间质细胞钙化的保护作用［J］.
2021年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（10）：1440-1446 ·1445 ·

A 正常对照组 华法林处理组 EGB761干预组 rhBMP2干预组

B 800 # C 8 D 4 # E 5
钙含量（ μg/mg蛋白 ） 600 * （ U/mg蛋白 ） ALP 6 4 2 * # Runx2 mRNA相对表达量 3 2 1 * Msx2 mRNA相对表达量 4 3 2 1 * #

400
200
0
0
0
0
华法林处理组
华法林处理组
华法林处理组
正常对照组 rhBMP2干预组 正常对照组 rhBMP2干预组 正常对照组 rhBMP2干预组 正常对照组 rhBMP2干预组
华法林处理组
EGB761干预组
EGB761干预组
EGB761干预组
EGB761干预组
F G 4 Runx2
rhBMP2干预组
华法林处理组
正常对照组 EGB761干预组 3 # # p⁃Smad1/5
Runx2 50 kDa 蛋白相对表达水平 2 * *
p⁃Smad1/5 37 kDa 1 0
rhBMP2干预组
正常对照组 EGB761干预组
华法林处理组
A：茜素红染色（×40）；B：细胞内钙含量；C：细胞内ALP活性；D：Runx2的mRNA表达量；E：Msx2的mRNA表达量；F：Runx2和p⁃Smad1/5的
免疫印迹；G：各组蛋白相对表达量。与华法林处理组相比，P < 0.05；与EGB761干预组相比，P < 0.05（n=6）。
#
*
图4 EGB761通过 BMP2/Smad1/5/Runx2通路抑制钙化和成骨分化
Figure 4 EGB761 blocks calcification and osteogenesis differentiation by inhibition BMP2/Smad1/5/Runx2 signaling path⁃
way

细胞钙化模型 ，即治疗水平（10 μmol/L）的华法林 少，抑制了 Smad1/5 复合物磷酸化后由胞浆转位进
［7］
联合低剂量的Pi处理瓣膜间质细胞，在此基础上给 入细胞核，从而进一步抑制了调节各种靶基因的转
予EGB761共同干预处理钙化的瓣膜间质细胞。本 录包括Runx2和Msx2的表达。
研究结果提示，EGB761 可以明显抑制华法林诱导 综上所述，本研究首次证实，EGB761 可能通过
的瓣膜间质细胞的钙含量，下调 ALP 活性，从而减 减少BMP2的表达抑制Smad1/5磷酸化，阻止其由胞
少细胞内钙结节形成。Real⁃time PCR 和 Western 浆进入细胞核，从而抑制了Runx2和Msx2的表达上
blot的结果均进一步提示，EGB761抑制了华法林诱 调，抑制了 BMP2/Smad1/5/Runx2 信号通路的激活，
导的瓣膜间质细胞成骨分化，Runx2、Msx2 以及 缓解了瓣膜间质细胞钙化及成骨样分化。这一研
BMP2的mRNA 表达和蛋白表达量均显著降低。给 究结果为将来临床防治钙化性主动脉瓣疾病提供
予 rhBMP2 进一步验证了上述结果，EGB761 降低了 了新的分子靶点及方向。

华法林诱导瓣膜间质细胞的钙沉积、钙含量及 ALP ［参考文献］
活性，下调了参与瓣膜间质细胞成骨分化的基因表
［1］ TSANG H G，CUI L，FARQUHARSON C，et al. Exploit⁃
达，这一作用可以被 rhBMP2 显著逆转。Western
ing novel valve interstitial cell lines to study calcific aor⁃
blot 结果进一步证实了 EGB761 抑制了 Smad1/5 磷 tic valve disease［J］. Mol Med Rep，2018，17（2）：2100-
酸化及 Runx2 的表达上调，可能与抑制了 BMP2/ 2106
Smad1/5/Runx2 通路有关，其机制可能是 EGB761 减 ［2］ LINDMAN B R，CLAVEL M A，MATHIEU P，et al. Cal⁃
少了 BMP2 的表达，使 BMPR⁃Ⅰ和 BMPR⁃Ⅱ激活减 cific aortic stenosis［J］. Nat Rev Dis Primers，2016，2：