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第41卷第10期 刘 静，孔祥清. 银杏叶提取物对瓣膜间质细胞钙化的保护作用［J］.
2021年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（10）：1440-1446 ·1443 ·

1.2 诱导AVIC成骨样分化标志蛋白Runx2、Msx2、BMP2
1.0 的 表 达 均 明 显 增 加（P < 0.05），给 予 0.3 mg/mL
nm ） 0.8 EGB761 处理细胞后，Runx2、Msx2、BMP2 的表达均
（ 450 D 0.6 * 显著降低（P < 0.05）。结果表明，EGB761 抑制了
0.4
0.2 * AVIC 内成骨分化蛋白 Runx2、Msx2 和 BMP2 的激
0 0.1 0.3 0.5 0.7 活，从而发挥了抗成骨分化的保护作用（图3）。
华法林处理组
正常对照组 EGB761干预组（mg/mL） 2.4 EGB761 通 过 BMP2/Smad1/5/Runx2 通 路 抑 制

与正常对照组比较，P＜0.05（n=6）。 AVIC成骨样分化
*
将 100 ng/mL rhBMP2 与 EGB761 共 同 孵 育
图1 不同浓度的EGB761与华法林对AVIC活性的影响 pAVIC。茜素红染色、细胞内钙含量及 ALP 活性检
Figure 1 The effect of EGB761 on AVIC viability under
warfarin treatment 测结果显示，EGB761 显著降低了华法林诱导 AVIC
的钙沉积、钙含量及 ALP 活性，而这一作用可以被
上述结果提示，0.3 mg/mL EGB761 可以减轻华法林 rhBMP2 显著逆转（P < 0.05，图 4A~C）。Real⁃time
诱导的 AVIC 钙沉积，从而显著抑制了 AVIC 的钙 PCR 结 果 显 示 ，rhBMP2 上 调 了 EGB761 抑 制 的
化。后续选择0.3 mg/mL EGB761进行成骨分化机制 Runx2 和 Msx2 mRNA 表 达（P < 0.05，图 4D、E）。
的研究。 Western blot 结 果 显 示 ，rhBMP2 显 著 增 加 了 被
2.3 EGB761抑制华法林诱导AVIC的成骨分化 EGB761 抑制的 Runx2 以及磷酸化 Smad1/5 蛋白的
Real⁃time PCR和Western blot结果显示，华法林 表达水平（P < 0.05，图 4F）。结果表明，EGB761 可

A 正常对照组 华法林处理组 0.1 mg/mL EGB761干预组 0.3 mg/mL EGB761干预组

（ μg/mg蛋白 ） 600 # 2 （ U/mg蛋白 ） 6 4 #
B 800 * C 8 *

400
钙含量 200 0 ALP 0

华法林处理组
华法林处理组
正常对照组 EGB761干预组 正常对照组 EGB761干预组
0.1
0.3
0.3
0.1
（mg/mL）
（mg/mL）
A：茜素红染色：拍照扫描（上）和显微镜（下，×40）；B：细胞内钙含量；C：细胞内ALP活性。与正常对照组相比，P < 0.05；与华法林处理组
*
相比，P＜0.05（n=6）。
#
图2 EGB761对AVIC钙化的抑制作用
Figure 2 The inhibition of EGB761 on calcification in AVIC