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第41卷第10期 陈红全，王建瑛. 利用可诱导表达Cas9的HeLa细胞系进行顺铂耐药性基因筛选［J］.
2021年10月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（10）：1432-1439，1452 ·1439 ·

A B
cPPT -Dox，+Library +Dox，+Library
psi+
sgRNA
μg/mL
RRE U6 EF1a Puro
顺铂0.9
LTR LTR
pLKO.1⁃U6 sgRNA文库
C
sgRNA种类 克隆数
VDR⁃sgRNA 21
μg/mL
RARb⁃sgRNA 02
顺铂1.5
RXRb⁃sgRNA 01
NR5A1⁃sgRNA 01

D
野生克隆

360 370 380 390 400
突变克隆

360 370 380 390 400
A：慢病毒sgRNA文库示意图；B：Dox诱导后，感染sgRNA文库的细胞会有抵抗顺铂的单克隆长出，未加Dox诱导的组无细胞存活（×50），
标尺：500 μm；C：单克隆细胞经测序鉴定出sgRNA序列；D：对含有VDR⁃sgRNA的克隆进行目标基因的测序鉴定。sgRNA识别位点绿色下划
线标记，PAM序列红色下划线标记。
图3 顺铂耐药性核受体基因的筛选
Figure 3 Screening of cisplatin⁃resistant nuclear receptor genes

过直接敲除或者过表达VDR进行正反验证，具体的 ［6］ KIM S，KIM D，CHO S W，et al. Highly efficient RNA⁃
机制也值得我们深入去解析。 guided genome editing in human cells via delivery of puri⁃
fied Cas9 ribonucleoproteins［J］. Genome Res，2014，24
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