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第41卷第11期         吴   越，邱   峰. 急性呼吸窘迫综合征新生儿血浆miR⁃6833⁃3p的表达水平及诊断效能［J］.
                 2021年11月                    南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（11）：1614-1619                      ·1615 ·


                ARDS group was significantly up⁃regulated（P < 0.01）and positively correlated with the acute physiological score in APACHE Ⅱ score
               （r=0.731，P < 0.001）. The miR⁃6833⁃3p may be closely related to PI3⁃K/Akt and MAPK signaling pathways according to target gene
                prediction analysis. ROC curve showed that area under the curve was 0.848，with optimum threshold was 1.03，Youden’s index was
                0.59 with sensitivity of 84.55% and specificity of 75.36%. Conclusion：The miR⁃6833⁃3p was significantly raised in neonatal ARDS，
                and may has certain clinical diagnostic efficacy as a new biomarker of neonatal ARDS.
               ［Key words］ neonatalacute respiratory distress syndrome；miR⁃6833⁃3p；diagnostic efficacy；neonate
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2021，41（11）：1614⁃1619］





                                                                                              ［8］
                    急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress          勒标准（2017 年版）》诊断标准 ；②经影像学检查
                syndrome，ARDS）是指机体在受到各种病理刺激（如                    （X线胸片显示双肺弥漫性阴影伴肺水肿改变，超声
                创伤、感染、缺氧、休克等）后发生的肺部急性炎症                           心动图检查无左心房高压表现），并结合临床症状
                反应，主要病理变化为急性弥散性肺泡上皮细胞损                            及体征确诊；③急性起病，机械通气时间≥72 h，胎
                伤及肺泡毛细血管内皮细胞损伤，临床上表现为进                            龄＞34 周。排除标准：①肺外严重感染；②原发性
                行性的呼吸窘迫和难治性的低氧血症，是新生儿临                            肺泡表面活性物质缺乏、先天性心脏病及先天性代
                                 ［1］
                床常见的危急重症 。据统计，新生儿 ARDS 占所                         谢紊乱；③肺和胸壁的畸形及其他严重的先天畸
                有需要机械通气新生儿的 1%~2%，病死率为 50%~                       形。本研究经医院伦理委员会审核通过，并与患儿
                60%，是导致新生儿死亡的重要原因之一                   ［2-4］ 。然    家属签署知情同意书。
                而，目前对于新生儿 ARDS 的诊断仍然依靠临床指                             急 性 生 理 与 慢 性 健 康（acute physiology and
                标的综合诊断，尚未找到特异性的标志物。因此，                            chronic health evaluationⅡ，APACHEⅡ）评分中的急
                寻求一种有效、准确的生物学标志物以提高对新生                            性生理评分（acute physiology score，APS），包含生命
                儿ARDS的诊断效能尤为重要。                                   体征、血常规、血气分析等共12项常用指标，指标正
                    作为一类新型的基因调控分子，微小核糖核酸                          常为0分，如各项指标偏离正常值，根据其偏离程度
               （miRNA）可通过影响靶基因的表达而调控炎症通路                          记录 1~4 分，总分相加以反映 ARDS 患儿的疾病严
                                                        ［5］
                和免疫反应，在ARDS发病过程中起重要作用 。现                          重程度。
                有的研究对新生儿ARDS发生发展机制仅仅在基因                           1.2  方法
                水平进行了初步揭示 。通过检索 miRNA 与新生                         1.2.1 总RNA提取
                                   ［6］
                儿ARDS关系发现，该类研究仍较少 ，miRNA是否                            所有患儿均于确诊次日采集空腹静脉血3 mL，
                                                ［7］
                参与了新生儿ARDS发展过程中的炎性调控也少见                           置于未加抗凝剂的离心管中，2 h 内 3 500 g 离心
                报道，以该类miRNA作为干预靶标从而防治新生儿                          5 min，进行血清分离，DEPC 处理后于-80 ℃低温冰
                ARDS的效果并不理想。本研究通过筛选与新生儿                           箱保存备用。选取上述血清解冻并加入RNA提取液
                ARDS 有关的差异表达 miRNA，获得可能的靶基因                       TRIzol（Ambion公司，美国），室温下孵化10 min后加
                miR⁃6833⁃3p，并进一步进行验证，初步探究 miR⁃                    入 200 μL 氯仿，在振荡器上（14 000 g 离心 15 min）
                6833⁃3p在新生儿ARDS发病中的作用机制，通过检                       进行充分混匀。随后将上清转至新的试管中并加
                测新生儿 ARDS 血清 miR⁃6833⁃3p 的表达水平，分                  入 500 μL 异丙醇进行 RNA 提取，通过再次离心及
                析其对新生儿ARDS的诊断效能。                                  加入75%的乙醇洗涤，分光光度仪对总RNA进行识
                                                                  别，处理后于-80 ℃低温冰箱保存备用。
                1  对象和方法
                                                                  1.2.2 miRNA的分离及提取
                1.1  对象                                               每100 μg的总RNA加入5倍体积的细胞溶解缓
                    选取南京医科大学附属儿童医院2019年1月—                        冲液，随后加入1/10体积的匀浆液添加剂及1/3体积

                2020年1月新生儿重症监护病房收治的25例ARDS                        的100%乙醇，在冰上充分混匀过滤并以5 000 r/min
                患儿为ARDS 组，同期选取32例在本院的普通新生                         离心1 min。随后移除上清液体加入700 μL miRNA
                儿（无严重疾病、无需氧疗的新生儿）为对照组。入                           洗涤液以15 000 r/min离心1 min，再次加入500 μL洗
                选标准：①符合《新生儿急性呼吸窘迫综合征蒙特                            涤液以5 000 r/min离心1 min并重复2次，去除残液
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