Page 32 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第2期
               ·182 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年2月


              hypothalamic CRF，nesfatin⁃1，CRF1R，and CRF2R compared with NC group（all P < 0.05）. The colonic 5⁃HT4R mRNA expression in
              MC group shows a decreased tendency（P=0.067）. In contrast，AA treatment significantly reduced the area under the curve（AUC）（P <
              0.05）. Further，compared to MC group，the mRNA expressions of hypothalamic CRF，nesfatin⁃1，CRF1R，and CRF2R of AA group
              significantly decreased（P＜0.05）while the colonic 5 ⁃ HT4R mRNA expression elevated（P＜0.05）. Conclusion：Low ⁃ frequency
              auricular electro⁃acupuncture could ameliorate the visceral sensitivity in rats with visceral hypersensitivity，which might relate to the
              regulation of mRNA expression of CRF，nesfatin⁃1，CRF1R，CRF2R in hypothalamus and of 5⁃HT4R in colon.
             ［Key words］ auricular acupuncture；visceral hypersensitivity；nesfatin⁃1；corticotropin releasing factor；irritable bowel syndrome
                                                                            ［J Nanjing Med Univ，2021，41（02）：181⁃186］





                  肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS）是         温 22~24 ℃，湿度 50%，光照周期 12 h/12 h，自由进
              临床最常见的功能性肠病，以腹痛、内脏高敏感、肠                           食。新生雄性乳大鼠随机分为空白组（10 只）与模
              动力异常以及排便习惯改变等一系列症状为主要                             型准备组（30只）。评价造模成功后，采用SAS 软件
              表现 。近来研究认为IBS发病以“脑⁃肠交互异常”                         产生随机数字法将模型准备组大鼠分为 3 组，每
                  ［1］
              为基础，婴幼时期经历的负性事件尤其是心理应激                            组10只。模型组：模型大鼠不予干预；耳针1组：模

              会极大地改变下丘脑⁃垂体⁃肾上腺轴（hypothalamo⁃                    型大鼠取双耳“胃”穴（双侧耳甲区中央）针刺+电刺
                                                                  ［7］
              pituitary⁃adrenal axis，HPA 轴）对应激的负反馈调节            激 ；耳针 2 组：模型大鼠取双耳“非穴区”（耳垂区
              功能，从而导致肠道免疫、动力以及疼痛感觉异常，                           中央）针刺+电刺激。所有实验操作遵循《动物实验
              产生相应症状 。                                          的伦理准则与指南》并在获得南京医科大学伦理委
                          ［2］
                  由前体肽核组蛋白 2（nucleobindin⁃2，NUCB2）              员会审批（IACUC⁃1905023）后开始实验。
              衍生而来的 nesfatin⁃1 表达异常升高是应激导致的                          PrimeScript™RT reagent Kit with gDNA Eraser 逆
              机体重要变化之一。Nesfain⁃1 促进下丘脑释放                        转录试剂盒（RR047A）、RNAiso Plus TRIzol（9108，
              HPA轴关键调节因子促皮质素释放因子（corticotro⁃                    TaKaRa 公司，日本）；实时荧光定量 PCR 仪（Stepone
              pin releasing factor，CRF），并通过其受体 1，2（corti⁃       plus，Applied Biosystems 公司，美国），分光光度计
              cotropin releasing factor receptor1/2，CRF1/2R）信 号  （Nano drop 2000，Thermo Fisher 公司，美国）。多道
                                          ［3］
              通路介导 IBS 的内脏高敏反应 ，HPA 轴激活最终                       生理采集系统（BL420，成都泰盟），麻醉机（ABS⁃
              诱使胃肠道5⁃羟色胺（5⁃hydroxytryptamine，5⁃HT）系             100，上海玉研仪器），电针仪（CMNS6⁃2 型，无锡佳
              统应答，5⁃HT 在胃肠道中含量占机体总量的 95%，                       健医疗），显微镜（H550S，尼康，日本）。
              是胃肠重要的神经递质之一。5⁃HT4 型受体（5⁃                         1.2  方法
              HT4R）在肠道各级神经元和肠细胞广泛分布，具有                          1.2.1 内脏高敏感大鼠模型造模
                                                                                                           ［8］
                                          ［4］
              促肠动力和保护肠黏膜的作用 ，其表达异常直接                                 采用“母婴分离结合醋酸灌肠”的造模方法 。
              导致肠动力、感觉调节障碍。                                     新生雄性乳大鼠出生后 2~21 d 行母婴分离，每天
                  耳针作为针灸重要分支，具有显著的调节中枢/                         3 h；并于出生后第 8~21 天，给予 0.5%醋酸灌肠，建
              外周神经系统的作用，并可通过神经⁃内分泌途径改                           立慢性结肠高敏感模型，空白组给予相同体积生理
              善相应组织器官功能          ［5-6］ ，本文通过建立母婴分离结             盐水。饲养至 6 周，通过结直肠扩张（colorectal dis⁃
              合醋酸灌肠诱导内脏高敏感大鼠模型，观察低频耳                            tension，CRD）刺激，记录腹外斜肌肌电活动（electro⁃
              电针后大鼠内脏痛阈的改变，下丘脑 CRF、CRF1R、                       myographic，EMG），验证内脏高敏感模型是否建立。
              CRF2R、nesfatin⁃1 及结肠 5⁃HT4R 的 mRNA 表达，初           1.2.2 耳针电刺激
              步探究耳针降低内脏高敏感的机制。                                       第 9 周开始，每日上午 8~12 点进行实验操作。

                                                                耳针1组、耳针2组大鼠2.0%~2.5%异氟烷吸入30 s
              1  材料和方法
                                                                后，采用固定装置固定大鼠，分别取相应部位针刺并
              1.1  材料                                           连接电针仪（CMNS6⁃2型，无锡佳健医疗），双极电针，
                  8只SD孕大鼠由南京大学模式动物中心提供，                         大鼠恢复至清醒状态后予以电针刺激，两组电针参数
              单笼饲养于南京医科大学 SPF 级实验动物中心，室                         与干预时间相同：频率2 Hz，强度（3.0±0.5）mA，连续
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