Page 39 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第2期 汪冬艳，张静静. YY1通过下调长链非编码RNA SOX2OT抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭［J］.
2021年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（02）：187-192 ·189 ·

BXPC⁃3⁃YY1⁃Vector）。定量 RT⁃PCR 证实 SOX2OT 表达组的BXPC⁃3和PANC⁃1细胞中SOX2OT表达水
表达。 平被显著抑制（P < 0.05，图 1），相反，YY1 干扰组
1.2.7 SOX2OT siRNA干扰片段转染及筛选 SOX2OT 表达水平与对照组相比显著增加（P <
转染前 1 d 铺 6 孔板（每孔 3×10 个细胞），长至 0.05，图1）。
5
50%~70%进行转染；Lipofectamine 3000 法体系（每 2.2 YY1对胰腺癌细胞迁移与侵袭能力的影响
孔）如下：分别以裸培 125 μL+siRNA 5 μL，裸培 细胞划痕实验结果表明：与对照组相比，YY1
125 μL+Lipofectamine 3000 5 μL两个预混液，各自充 过表达抑制 BXPC⁃3 细胞的迁移，相反 YY1 干扰促
分混匀，静置5 min；将两者混合后再次静置15 min， 进细胞的迁移（图 2A）。Transwell 细胞侵袭实验结
加入换了新鲜完全培养基的 6 孔板中；转染 24 h 后 果表明：与对照组相比，YY1 过表达组穿过基质胶
换液，2~3 d后提取RNA用定量RT⁃PCR进行转染效 的细胞数显著减少（P < 0.05，图2B），相反YY1干扰

率验证。3组SOX2OT干扰片段靶序列如下：siRNA⁃1 组穿过基质胶的细胞数与对照组相比显著增加
5′⁃CAAAATAGGTCATAGCAA⁃3′、siRNA⁃2 5′⁃GGA⁃ （P < 0.05，图2B）。
CAAG⁃ACAACATTTGGT⁃ 3′、siRNA⁃3 5′⁃CTCAC⁃ 2.3 SOX2OT对YY1的功能回复作用
CAATGCTTTAT⁃TCT⁃3′。 为了证明SOX2OT是否介导了YY1抑制胰腺癌

1.3 统计学方法 细胞迁移和侵袭的作用，在 YY1 过表达的 BXPC⁃3
采用SPSS15.0进行统计分析。定量数据显示为 细胞中过表达SOX2OT，或在YY1敲低的BXPC⁃3细
平均值±标准差（x ± s）。两组数据比较采用 t 检验。 胞中干扰 SOX2OT 的表达，观察其是否具有功能回
多组数据比较采用ANOVA⁃SNK检验。所有的统计 复作用。定量 PCR 结果表明：过表达 SOX2OT 稳转
检验都是双尾检验，P < 0.05为差异有统计学意义。 细胞株构建成功（图 3A）；3 组 SOX2OT 干扰片段中
siRNA⁃1 的干扰效率最高（图 3B），因此后续功能回
2 结 果
复实验选择 siRNA⁃1。细胞划痕实验结果表明：在
2.1 YY1对胰腺癌细胞中SOX2OT表达的调控 YY1过表达的BXPC⁃3细胞中过表达SOX2OT，可以
定量PCR及Western blot结果表明：YY1过表达 逆转过表达 YY1 抑制细胞迁移的作用（图 3C）；在
及YY1干扰的稳转细胞株（BXPC⁃3和PANC⁃1）构建 YY1敲低的BXPC⁃3细胞中干扰SOX2OT的表达，可
成功。定量 PCR 结果显示：与对照组相比，YY1 过 以逆转 YY1 敲低促进细胞迁移的作用（图 3D）。

A 0.60 B 0.40
BXPC⁃3 * YY1 0.35 PANC⁃1 * YY1
mRNA相对表达量 0.40 * mRNA相对表达量 0.25 * *
0.50
SOX2OT
SOX2OT
0.30
0.30
0.20
0.15
0.20
*
0.10
0.05
* 0.10 *
0.00 0.00
Vector YY1 YY1 shRNA Vector YY1 YY1 shRNA
Scramble shRNA Scramble shRNA
C D
BXPC⁃3 PANC⁃3
Scramble shRNA Scramble shRNA
YY1 shRNA
YY1 shRNA
Vector YY1 Vector YY1
YY1 —68 kDa YY1 —68 kDa
GAPDH —36 kDa GAPDH —36 kDa
A、B：定量PCR检测YY1过表达或干扰后胰腺癌细胞BXPC⁃3（A）和PANC⁃1（B）中YY1及SOX2OT mRNA表达水平，与Vector组比较，P＜
*
0.05。C、D：Western blot检测YY1过表达或干扰后BXPC⁃3（C）和PANC⁃1（D）中YY1蛋白表达水平。
图1 定量PCR及Western blot检测YY1过表达或干扰后胰腺癌细胞BXPC⁃3和PANC⁃1中YY1及SOX2OT mRNA
Figure 1 qRT⁃PCR and Western blot analyzed of YY1 and SOX2OT mRNA and protein expression in BXPC⁃3 and PANC⁃
1 pancreatic cancer cells with YY1 overexpressing or knockdown