Page 50 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第2期
·200 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年2月
细 胞 与 含 有 预 测 片 段 的 psiCHECK 质 粒 和 miR⁃ A
NA30a模拟物或阴性对照共转染。转染48 h后使用
双Glo荧光素酶测定系统测定荧光素酶活性。至少
等待 10 min~2 h，然后测量海肾萤光。海肾萤光的
平板测量顺序应该与萤火虫萤光相同。
1.3 统计学方法
使用 SPSS 13.0 进行数据分析。所有结果均以 B
miRNA⁃30a⁃5p
均值±标准差（x ± s）表示。采用单因素方差分析 10 hsa_circ_0001246
（ANOVA）、Dunnett⁃t检验和Student⁃t检验比较各组 8
实验数据的统计学差异，P < 0.05 为差异有统计学 6
意义。 相对表达水平 4
2 结 果 2
0
MG63 siRNA
U2OS siRNA
2.1 荧光显微镜下观察转染效率 MG63 MG63 NC U2OS U2OS NC
倒置荧光显微镜下观察荧光信号，选择最佳的
转染时间和条件，荧光标记对照组转染效率均在 A：荧光显微镜下观察转染效率均在60%以上（×100）；B：转染后
60%以上（图1A）。 circ_0001246表达下调，miRNA30a表达上调，两者呈负相关。
2.2 转染后各组细胞circ_0001246和miRNA30a的 图 1 转 染 后 骨 肉 瘤 细 胞（MG63、U2OS）circ_0001246，
miRNA30a的表达
表达
Figure 1 Expression of circ_0001246 and miRNA30a in
circ_0001246 siRNA 转染组中 circ_0001246 表 osteosarcoma cells（MG63，U2OS）after trans⁃
达明显低于 NC 组和空白组（P < 0.05）。转染 circ_ fection
0001246 siRNA组的miRNA30a表达较NC组和空白
组明显上调（P < 0.05，图1B）。发现circ_0001246和 见于股骨远端或胫骨近端，是一种原发性的恶性骨
miRNA30a的表达呈现负反馈。这一结果提示circ_ 肿瘤。骨肉瘤恶性程度高，往往在术前就有了微小
［9］
0001246 在骨肉瘤细胞中可能对 miRNA30a 发挥了 转移灶，加上容易局部复发，患者预后很差 。虽然
miRNA“吸附”作用。 如今化疗技术进步，但即使采用手术联合化疗的治
2.3 转染后各组细胞对化疗药物依托泊苷的敏感 疗方案，患者５年生存率也不令人满意 ［10-11］ 。骨肉
性检测 瘤导致患者死亡的原因主要是病变转移迅速和对
作用 6 h，3 组细胞凋亡率无明显差异（P > 化疗的抵抗，一旦出现肺转移，正常情况下辅助化
0.05）；作用12 h，circ_0001246 siRNA 转染组细胞凋 疗对其作用不大 ［12］ 。随着基因治疗等生物治疗技
亡率较NC组和空白组明显升高（P < 0.05）；作用24 h， 术的发展，骨肉瘤的综合治疗有了新的进展，而怎
circ_0001246 siRNA 转染组细胞凋亡率较 NC 组和 样通过基因技术提高骨肉瘤化疗的敏感性也成为
空白组明显升高（P < 0.05）。转染 circ_0001246 骨肉瘤治疗的关键。
siRNA后肿瘤细胞对化疗药物依托泊苷的敏感性明 随着生物信息学和分子生物学技术的革新，证
显增高（图2）。 实了哺乳动物细胞中广泛存在着一种具有调控基
2.4 荧光素酶报告基因实验 因表达作用的内源性 circRNA ［13］ 。circRNA 主要来
将 psiCHECK 载体和 miRNA30a 模拟物或阴性 源于 pre⁃mRNA 的可变剪切，由套索驱动的环化或
对照共转染MG63细胞，miRNA30a过表达细胞与对 内含子配对驱动的环化产生，分为外显子、内含子、
照组相比，荧光素酶活性显著下降（P < 0.05，图 外显子与内含子混合等 3 类来源，之前被认为是一
3）。这些数据表明，circ_0001246 可以通过直接碱 类错误剪接而形成的低丰度 RNA 分子，其表达水
基对吸附miRNA30a。 平和功能在之前受到了忽略。最新的研究表明一
些 circRNA 可以 ceRNA 的角色发挥基因表达调控
3 讨 论
作用，这些 circRNA 拥有 MRE，可以作为结合 miR⁃
骨肉瘤起源于骨间叶细胞，多见于长骨，也可 NA 的天然“海绵”来阻断后者对靶RNA的抑制作用，
