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第41卷第2期
               ·196 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年2月


               表3 Sanger测序法、ddPCR法和高通量测序法特点比较                   极低，3 号外显子上 61 号密码子突变最常见，其次
              Table 3  The characteristics comparison of ddPCR，  是 2 号外显子上的 12 号密码子突变            ［17］ 。本研究检
                       Sanger sequencing and high ⁃ throughput se⁃
                                                                出 NRAS 基因 12 号密码子 G12D 位点突变及 D33E
                       quencing
                                                                罕见位点突变，由于样本量较小，并未检出 61 号密
                 特点       Sanger测序      ddPCR     高通量测序         码子突变。Song等 研究指出NSCLC中Her⁃2 基因
                                                                                 ［18］
              定量检测       不能定量检测       可绝对定量       可定量检测
                                                                突变以插入突变最为常见，其次为 P761H 位点突
              检测灵敏度         10%      0.04%~0.10%     1%
                                                                变。本研究与之不同，检出的 3 例突变均为 P761H
              检测范围      已知和未知突 已 知 特 定 突 已知和未知突
                                                                位点突变，未检出插入突变，具体原因还需进一步
                        变 ，可 提 供 基 变，无法提供 变，可提供基
                                                                分析。本研究中PIK3CA基因突变检出率为4.67%，
                        因序列信息        基因序列信息 因序列信息
              检测周期          2~3 d        1 d        3~5 d       与此前的研究相符         ［19］ 。除 1 例标本检出 PIK3CA 基
              检测通量         低通量          低通量         高通量         因 2 个不同位点的复合突变外，其余 6 例突变均和
                                                                其他驱动基因以复合突变的形式存在，该特征与
              3  讨 论                                                      ［7］
                                                                Scheffler等 学者的研究一致。
                  随着高通量测序技术的不断发展，以其为技术                               近年来国内外的研究发现，肿瘤驱动基因可以
              基础的基因检测在 NSCLC 诊疗中的应用日益广                          以复合突变的形式存在            ［17，20］ ，本研究也得到相同的
              泛。本研究选择了NSCLC诊疗中相关的6个驱动基                          结论，共发现9例标本存在驱动基因复合突变，这提
              因进行高通量测序检测，并分析其在我国NSCLC患                          示某些 NSCLC 的形成可能不单是一个驱动基因的
              者中的变异情况。                                          作用，而是多个驱动基因共同作用的结果。
                  EGFR 基因突变是 NSCLC 最常见的突变基因，                         本研究通过对 EGFR 基因突变的检测，分析比
              本研究 EGFR 基因突变的检出率为 51.33%，与以往                     较了 Sanger 测序法、ddPCR 法和高通量测序法 3 种
              的研究报道相符        ［9-10］ 。检出的 EGFR 基因突变以常            不同的方法。高通量测序法与基因检测金标准
              见的 19 外显子缺失突变和 21 外显子 L858R 位点突                   Sanger测序法相比较，EGFR基因突变检出率大幅提
              变为主，同时也检测到罕见位点突变。文献报道，                            升，差异有统计学意义。高通量测序法检测灵敏度
              EGFR 基因18外显子G719S罕见位点突变对TKI治                      明显高于 Sanger 测序法，但研究中发现 1 例标本
              疗敏感，但其敏感性不及常见突变，同时厄洛替尼                            Sanger测序法检出19外显子缺失突变，但高通量测
              比吉非替尼在罕见突变方面有更好的疗效                     ［11］ 。18   序法却并未检出，猜测可能是高通量测序法生物信
              外显子E709X罕见位点突变与G719S罕见位点突变                        息学软件分析结果时产生错误。高通量测序法与
              相比，敏感性更低        ［12］ 。21外显子L861Q罕见位点突             新技术 ddPCR 法检测 EGFR 基因突变，检出率差异
              变同 18 外显子 G719S 罕见位点突变一样表现出不                      无统计学意义。理论上ddPCR法检测EGFR基因突
              及常见突变的敏感性          ［12］ 。20 外显子 T790M 位点突         变应有更高的突变检出率，但实践中ddPCR法商用
              变经大量研究证实是耐药位点               ［12，13］ 。本研究中有 9      检测试剂盒仅能检测少数已知的热点突变，部分罕
              例患者检出 EGFR 基因双位点复合突变，有研究指                         见和未知突变无法检测，导致突变检出率并不高。
                                                                综合来看，高通量测序法拥有更高的检测通量和突
              出，罕见突变的复合突变其疗效要优于单一罕见突
              变 ［12，14］ 。本研究中尚有部分罕见突变未见报道或相                     变检出率，并可同时检测多个基因，更适合应用于
                                                                NSCLC诊疗。Sanger测序法和ddPCR法可作为有益
              关证据不足，还需进一步研究。
                                                                的补充。
                  本研究中KRAS基因突变检出率与文献报道相
                                                                     虽然高通量测序技术应用于 NSCLC 诊疗过程
              吻合  ［15］ 。文献报道KRAS基因突变以G12C和G12V
                                                                中仍有诸多问题亟待解决，但随着高通量测序技术
              突变位点最为常见         ［15］ ，而本研究与之不同，G12D 位
                                                                的不断发展，持续降低成本，缩短检测周期及提高
              点突变检出最多。Zer等          ［16］ 学者的研究表明，G12C/
                                                                准确性，将更广泛地应用于肿瘤尤其是NSCLC的临
              G12V 位点突变患者经TKI治疗后预后差，而G12D/
                                                                床诊断及个体化治疗中。
              G12S 位点突变患者可以从 TKI 治疗中获益。本研
              究检测到的 2 例 BRAF 基因突变，1 例为经典的                       ［参考文献］
              V600E 位点突变，另 1 例为 L618F 位点罕见突变。                   ［1］ BRAY F，FERLAY J，SOERJOMATARAM I，et al. Glob⁃
              研究表明，NRAS 基因突变在 NSCLC 中的发生频率                           al cancer statistics 2018：GLOBOCAN estimates of inci⁃
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