Page 40 - 南京医科大学学报自然科学版

第40卷第6期41卷第3期
第
2021
·346 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2020年6月年3月

体差异，LSD⁃t 法进行组间两两比较；多组数据（同 变化，将HCT116、HT29细胞分别放置于缺氧环境中
一研究对象在不同因素处理的测量数据）采用单因 （1%O2 ），结果提示 AQP3 mRNA 表达水平增加（图
素方差分析总体差异，LSD⁃t法进行组间两两比较； 1A、B，P < 0.05），AQP3 蛋白表达水平亦显著增加
P < 0.05为差异有统计学意义。 （图 1C、D）。因此，缺氧条件下，CRC 细胞通过转录
水平上调AQP3 mRNA表达，继而导致AQP3蛋白表
2 结 果
达水平增加。
2.1 缺氧条件下结直肠癌细胞AQP3表达上调 2.2 缺氧通过HIF⁃1α上调结直肠癌细胞AQP3表达
为研究缺氧条件下AQP3在CRC细胞中表达的 HIF⁃1α是介导细胞对缺氧反应的重要转录调

A B C D
HCT116 h HT29 h
*
HCT116细胞中AQP3 mRNA相对表达量 2 1 * HT29细胞中AQP3 mRNA相对表达量 3 2 1 * AQP3 常氧 缺氧12 缺氧24 35 kDa AQP3 常氧 缺氧12 缺氧24 35 kDa
3
4
*
h
h
0
常氧 缺氧12 h 缺氧24 h 0 常氧 缺氧12 h 缺氧24 h GAPDH 37 kDa GAPDH 37 kDa

A、B：通过RT⁃qPCR验证在缺氧条件下，HCT116细胞（A）和HT29（B）中AQP3 mRNA表达水平上调；C、D：通过Western blot验证在缺氧条
件下，HCT116细胞（C）和HT29（D）中AQP3蛋白表达水平上调，P < 0.05（n=3）。
*
图1 缺氧条件下结直肠癌细胞AQP3表达上调
Figure 1 AQP3 expression in colorectal carcinoma cells was significantly up⁃regulated under hypoxic condition

节因子。HCT116 细胞在缺氧 12 h、24 h 后，HIF1α 性下降。然而，AQP3 在缺氧介导 CRC 细胞化疗耐
蛋白表达水平显著上调（图 2A）。采用 siRNA 抑制 药中的作用尚不清楚。本研究采用siRNA技术抑制
HIF⁃1α表达后，再将HCT116细胞置于缺氧条件下， AQP3 表达，继而发现在缺氧条件下，HCT116 细胞
AQP3 mRNA、蛋白表达水平均未显著增加（图 2B、 对 5⁃Fu 化疗敏感性增加（图 3B，P < 0.05）。平板克
C，P < 0.05）。因此，缺氧通过HIF⁃1α上调CRC细胞 隆形成实验进一步证实了缺氧可导致结直肠癌细
AQP3 mRNA的表达，继而导致AQP3蛋白表达水平 胞对 5⁃Fu 化疗敏感性的降低，抑制 AQP3 表达可逆
增加。 转此效应（图 3C、D，P < 0.05）。因此，本研究认为
2.3 缺氧条件下抑制AQP3表达增加了结直肠癌细 AQP3参与缺氧介导的CRC化疗耐药。
胞对5⁃Fu的化疗敏感性
3 讨 论
CCK⁃8实验发现，HCT116细胞在5⁃Fu 作用下，
缺氧条件下的细胞活力高于常氧条件（图 3A，P < 缺氧是实体肿瘤微环境的主要特征，且参与
0.05），提示缺氧导致 CRC 细胞对 5⁃Fu 的化疗敏感 肿瘤细胞生物学行为变化以及肿瘤化疗耐药的

A B 2 si⁃Ctrl C si⁃Ctrl si⁃HIF⁃1α
mRNA相对表达量 1
常氧 缺氧12 h 缺氧24 h si⁃HIF⁃1α HIF⁃1α 120 kDa
HIF⁃1α 120 kDa * * AQP3 35 kDa

GAPDH 37 kDa GAPDH 37 kDa
0
HIF⁃α AQP3
A：Western blot验证缺氧条件下HCT116细胞中HIF⁃1α蛋白表达水平上调；B：通过RT⁃qPCR验证在缺氧条件下，抑制HCT116细胞中HIF⁃
1α表达，HIF⁃1α和AQP3 mRNA表达水平下调；C：Western blot验证在缺氧条件下，抑制HCT116细胞中HIF⁃1α表达，HIF⁃1α和AQP3蛋白表达
水平下调。两组比较，P < 0.05（n=3）。
*
图2 缺氧通过HIF⁃1α上调结直肠癌细胞中AQP3表达
Figure 2 Hypoxia upregulated AQP3 expression by HIF⁃1α in colorectal carcinoma cells