Page 53 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第3期 徐大来，司 远，田 蕾，等. 免疫效应细胞增殖与细胞毒性功能检测3种方法的比较［J］.
2021年3月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（03）：355-360，414 ·359 ·

A
效靶比2.5∶1 效靶比5∶1 效靶比10∶1
10 6 10 6 10 6
剩余靶 10 5 剩余靶 10 5 剩余靶
细胞
细胞
细胞
5
10
组1 DeepRed APC⁃A 10 4 DeepRed APC⁃A 10 4 DeepRed APC⁃A 10 4
空白对照 10 3 2 10 3 2 10 3 2
10 6 10 10 10
靶细胞 10 2 Dalcein FITC⁃A 5 10 6 10 2 Dalcein FITC⁃A 5 10 6 10 2 Dalcein FITC⁃A 5 10 6
3
3
4
3
4
4
10
10
10
10
10
10
10
10
10
DeepRed APC⁃A 10 4 3 10 6 剩余靶细胞 1 364 10 6 剩余靶细胞 1 119 10 6 剩余靶细胞 811
5
10
效靶比5∶1
效靶比2.5∶1
效靶比10∶1
剩余活
剩余靶
剩余靶
10
10 2 10 5 细胞 10 5 细胞 10 5 细胞
10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 组2 4 4 4
Dalcein FITC⁃A DeepRed APC⁃A 10 DeepRed APC⁃A 10 DeepRed APC⁃A 10
靶细胞 2 084 10 3 10 3 10 3
10 2 10 2 10 2
10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6
Dalcein FITC⁃A Dalcein FITC⁃A Dalcein FITC⁃A
剩余靶细胞 1 258 剩余靶细胞 1 038 剩余靶细胞 694
B 80 * 组1 C 31.00 D 80 * 组1
（ % ） 60 * * 组2 ∶ 1 2.5 23.00 （ % ） 60 * 组2
效应细胞毒性 40 1 5 ∶ 1 15.00 效应细胞毒性 40 *
20
20
0 10 ∶ 7.00 0
10∶1 5∶1 2.5∶1 10∶1 5∶1 2.5∶1
效靶比 组1 组2 空白对照 效靶比
E 80 * 组1 F G
（ % ） 60 * 组2 （ % ） 80 P＜0.001 （ % ） 80 P＜0.001
效应细胞毒性 40 荧光素酶法 所得杀伤率 60 LDH释放法 所得杀伤率 60 rS=0.973 2
40
40 rS=0.979 4
20
20
20
0 0 0
0 20 40 60 80 0 20 40 60 80
10∶1 5∶1 2.5∶1 双标流式法所得杀伤率（%） 双标流式法所得杀伤率（%）
效靶比
A、B：双标流式法检测结果：右上象限双阳性细胞群为存活的靶细胞（A）及3次重复实验的统计图（B），两组比较，P＜0.05；C、D：荧光素酶
*
法检测结果（C）及3次重复实验的统计图（D），两组比较，P＜0.05；E：LDH释放实验3次重复实验的统计结果，两组比较，P＜0.05；F、G：以双
*
*
标流式法为标准，用Spearman秩相关系数分析荧光素酶法（F）和LDH释放法（G）与双标流式法的相关性。
图2 3种细胞毒性检测方法结果与分析
Figure 2 Results and analysis of three cytotoxicity detection methods
素耗材的处置，生物安全检测，可能导致的环境污 光素酶法或LDH释放法。
染等系列问题。因此，近年来不断研发新的检测方 总之，本研究不仅在实验模型上详细对比研究
法来替代 Cr 释放实验方法，包括本研究选用的作 了 3 种增殖和 3 种细胞毒性功能检测方法，而且在
51
为“标准”的双标流式法 ［15］ 。比较实验表明本研究 实践经验的基础上系统总结了各类方法的原理、特
所选用的3种细胞毒性检测方法均具有较好的检测 点、适用性和实践应用时的注意点。因此，需要依
效果，且具有很高的一致性，但也各有优劣（表 2）。 据实验室条件、实验对象与目的等多种因素，在追
因此，对于靶细胞为悬浮细胞的，建议首选双标流 求稳定、精准和标准化的目标下，综合考虑后选择
式法，贴壁靶细胞可根据实验室条件及需求选择荧 适合实验体系的检测方法。