Page 54 - 南京医科大学学报自然科学版

第
第40卷第6期41卷第3期
·360 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2020年6月年3月
2021

表1 3种增殖检测方法的比较
Table 1 Comparison of three proliferation detection assays
方法 原理 特点及优劣 拓展应用 参考文献
CCK⁃8检测法 通过检测细胞代谢 操作简便、经济、可连续观察细胞增殖； 可以作为研究悬浮细胞代谢 —
活性间接反映细胞 孔板内的培养液易挥发，无法保证最终 组学的基础，如在某种特定
数量 检测体系的体积，造成随机误差 刺激下细胞整体代谢的改变
EdU标记法 以嘧啶类似物的形 直接反映处于增殖状态的细胞，检测结 EdU 有可能在活细胞中跟踪 Cavanagh等 ［8］
式整合入合成期的 果精准、可靠；悬浮细胞的EdU检测操作 DNA复制和复制过程中标记
DNA双链，通过检测 较贴壁细胞繁琐；荧光显微镜拍摄缺乏 细胞的命运
处于 S 期细胞占比 客观性，最佳检测仪器为流式细胞仪；
直接反映细胞增殖 EdU 自身可以抑制某些细胞生长
CFSE标记法 CFSE 与细胞稳定结 直接反映细胞的分裂情况，通过荧光衰 可区分在某种特定刺激下分 Terrén等 ［9］
合并将荧光物质平 减提示扩增；CFSE 荧光仅能稳定传 7~8 裂与不分裂的细胞亚群，并
均分配给子代 代，不适用于长期观察细胞增殖 跟踪不同的细胞亚群的功
能，如特定标记的表达或细
胞因子的产生

表2 3种细胞毒性检测实验的比较
Table 2 Comparison of three kinds of cytotoxicity detection assays

方法 原理 特点及优劣 参考文献
Calcein⁃AM/ 所用荧光染料为活细胞染料，被标 操作简便，靶细胞准备仅需半小时；经济、安 Jang ［15］
CellTracker Deep Red 记细胞死亡则荧光随之消失，通过 全；双荧光染料增加实验的准确性；基于流
双标流式法 检测双阳性细胞直接反映剩余靶细 式细胞仪的检测结果准确度高、可重复性
胞数 好；不适用于对贴壁靶细胞的杀伤
荧光素酶法 荧光素酶与底物反应依赖细胞中活 操作简便，无需繁琐的准备，对贴壁和悬浮 Karimi ［11］
性 ATP，通过检测剩余靶细胞产生 靶细胞均适用；基于活体成像仪的检测结果
的荧光定量存活的细胞 直观可见，具有说服力；实验的可行性依赖
细胞内稳定表达荧光素酶，需提前转导
LDH释放法 正常情况下，LDH不能透过细胞膜， 操作简便，经济，对贴壁和悬浮靶细胞均适 Korzeniewski等 ［10］
当靶细胞受到杀伤后，LDH 释放到 用；对设备要求低，仅需酶标仪即可；随机误
细胞外，通过检测 LDH 的释放量来 差大，LDH 自发释放影响实验结果的稳定
定量受损细胞 性，靶细胞生长过密、离心速度过大均会导
致LDH自发释放

［参考文献］ Cytotherapy，2008，10（6）：625-632
［5］ 李 娜，薄常文，马文华，等. 过继免疫细胞治疗对原发
［1］ 温少迪，沈 波. 非小细胞肺癌免疫治疗作用机制及临
性肝癌患者免疫学指标的影响［J］. 中国现代医学杂
床研究现状［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），
志，2015，25（21）：31-34
2020，40（11）：1739-1746
［6］ TONN T，BECKER S，ESSER R，et al. Cellular immuno⁃
［2］ RILEY R S，JUNE C H，LANGER R，et al. Delivery tech⁃
therapy of malignancies using the clonal natural killer
nologies for cancer immunotherapy［J］. Nat Rev Drug Dis⁃ cell line NK⁃92［J］. J Hematother Stem Cell Res，2001，
cov，2019，18（3）：175-196
10（4）：535-544
［3］ GOGISHVILI T，DANHOF S，PROMMERSBERGER S A， ［7］ TERRÉN I，MIKELEZ I，ODRIOZOLA I，et al. Implica⁃
et al. SLAMF7⁃CAR T cells eliminate myeloma and con⁃ tion of interleukin⁃12/15/18 and ruxolitinib in the pheno⁃
fer selective fratricide of SLAMF7（+）normal lymphocytes type，proliferation，and polyfunctionality of human cyto⁃
［J］. Blood，2017，130（26）：2838-2847 kine⁃preactivated natural killer cells［J］. Front Immunol，
［4］ ARAI S，MEAGHER R，SWEARINGEN M，et al. Infu⁃ 2018，9：737
sion of the allogeneic cell line NK⁃92 in patients with ad⁃ ［8］ CAVANAGH B L，WALKER T，NORAZIT A，et al. Thy⁃
vanced renal cell cancer or melanoma：a phase I trial［J］. （下转第414页）