Page 52 - 南京医科大学学报自然科学版

第40卷第6期41卷第3期
第
·358 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2020年6月年3月
2021

A B Hoechst EdU Merge
nm ） 1.5 组1
组2
（ 450 1.0
D
0.5
组1
0
0 1 2 3 4
时间（d）

组2

200 μm

C D E
80 组1 组2 3 *
* 100 第2天 100 第2天
（ % ） 60 80 第1天 80 第1天 h扩增倍数 2
第0天
第0天
阳性细胞率 40 （ % ） 比例 60 （ % ） 比例 60 1
40
40
20
0 20 细胞24
0 0 0 0
组1 组2 10 4 10 5 10 6 10 7 10 4 10 5 10 6 10 7 组1 组2
CFSE⁃FITC CFSE⁃FITC
标记物 X⁃GMean 标记物 X⁃GMean
全部 146 916.89 全部 090 522.79
全部 297 623.03 全部 261 480.55
全部 667 884.25 全部 695 092.06
A：CCK⁃8法连续4 d检测两组NK92细胞增殖情况（n=5）；B、C：EdU标记法检测两组NK92增殖情况（B）及3次重复实验的统计图（C）；D、
E：CFSE标记法检测两组NK92细胞连续2 d的分裂情况（D）及3次实验的统计图（E）。两组比较，P＜0.05。
*
图1 3种增殖检测方法结果与统计
Figure 1 Results and statistics of three proliferation detection methods

结果，在 5∶1 与 10∶1 效靶比下，两组效应细胞的细 法，3种检测方法因为原理上有区别而各有特点（表
胞毒性差异显著（P＜0.05）。随后，为了验证3种杀 1）。CCK⁃8 法侧重于细胞代谢活性，EdU 标记法侧
伤检测方法的一致性，以双标流式法的检测值为标 重于直接检测处于S期的细胞，而CFSE标记法则侧
准参照，分别与荧光素酶法和LDH释放法的检测值 重于提供细胞分裂信息。如表1中拓展应用所展示
进行相关性分析，图2F、G结果所示，这两种方法的 的，这 3 种方法不仅可以检测细胞增殖而且可以反
检测值均与双标流式法的检测值呈显著相关性（rS= 映所测样品的其他生物功能信息。如何有效选择，
0.979 4，P＜0.001；rS=0.973 2，P＜0.001）。但相比另 需要综合考量实验需求、实验室条件等多种因素。
外两种检测方法，LDH 释放法的随机误差较大，因 当然本文未涉及的增殖检测方法如增殖细胞核抗原
此并未检测出效靶比为2.5∶1时两组细胞毒性的差 （proliferating cell nuclear antigen，PCNA） 、Ki67 等
［12］
［13］
异（图2E，P＞0.05）。 也都其特点和独特的适用性，如检测石蜡组织中细
胞的增殖。
3 讨 论
虽然传统的 Cr释放实验是检验细胞毒性功能
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免疫效应细胞的体外扩增是过继免疫治疗临 的金标准 ［14］ ，但是这种方法有一些缺点，如与同位
床应用研究最基础的步骤。本研究通过具体实验 素预孵育所需的时间较长，Cr的自发释放，特别是
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和对文献的系统总结，比较 3 种常用的增殖检测方 需要建立符合生物安全的同位素实验室，后期同位