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第41卷第3期      周 春，吕     红，张若洋，等. 基于MassARRAY平台的人血小板抗原基因分型的质谱检测方法［J］.
                  2021年3月                     南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（03）：361-368                       ·367 ·


                CD36 和 HPA。在卫生行政部门颁布的《临床输血                        提下，符合卫生经济学的要求。
                技术规范》以及卫生行业标准WS/T 623⁃2018《全血                         尽管HPA的基因频率分布在不同种族、不同区
                和成分血使用》中，只规定血小板输注需按照 ABO                          域中存在差异，但 HPA 多态性的分子基础已经阐
                同型或相合原则输注，致使多次随机输注血小板的                            明，除了 HPA⁃14w 的 AAG 三联体缺失导致的突变
                患者容易产生相应的HLA、CD36和HPA抗体，造成                        外，大多数抗原发生的变异主要是编码这些糖蛋白
                                                                                   ［5］
                免疫性血小板输注无效。仅就HPA系统而言，国际                           基因的 SNP 引起的 ，造成了对应蛋白质中氨基酸
                血小板命名委员会近年来已正式命名了 35 个用血                          的改变和血小板表面的糖蛋白多态性，这为已知血
                清学检出的血小板抗原，并将 35 个 HPA 分为 29 个                    小板变异的基因分型提供了基础。目前HPA基因分
                                                                  型检测方法主要有聚合酶链反应核苷酸特异性引物
                系统（或准系统），其中HPA⁃1、HPA⁃2、HPA⁃3、HPA⁃
                4、HPA⁃5、HPA⁃15 组成双等位基因的抗原系统，其                     技术（PCR⁃SSP）、核苷酸序列测定法（PCR⁃SBT）、基
                他抗原均未检出对偶抗原            ［5，7-8］ 。从理论上说，每个          于Luminex的聚合酶链反应序列特异性寡核苷酸探
                HPA 系统的抗原都可以引发特异性 HPA 抗体介导                        针技术（PCR⁃SSO）、实时定量荧光聚合酶链反应（real
                的免疫性血小板输注无效，因此血小板捐献者血型                            ⁃time PCR）、吸电离飞行时间质谱分析（MALDI⁃TOF⁃
                资料库范围最好涵盖上述 29 个 HPA 系统。国内迄                       MS）以及下一代测序技术（NGS）等            ［1，12-13］ ；以上分型方
                今尚未对血小板捐献者 HPA 基因型资料库的建库                          法均存在检测通量低、成本高以及自动化程度低等
                工作形成统一标准，各地根据当地实际情况和从卫                            缺陷，不利于开展大规模的建库工作。MassARRAY
                生经济学的角度出发，在建库过程中有选择性地对                            核酸质谱阵列基因分析系统是一个功能强大的核
                捐献者的 HPA 系统进行基因分型，主要有检测                           酸质谱定性定量平台，它完美地结合了质谱检测的
                HPA1~6、HPA⁃15、HPA⁃21w模式，HPA⁃1~17w模式、              高分辨率、PCR 扩增的高敏感度以及生物芯片技术
                                            ［9］                   的高通量，无需杂交及荧光染料等二级标记物，直
                HPA⁃1~21w 模式或者其他模式 。国内对 HPA1⁃
                28bw的研究已有报告 ，但HPA⁃29w在中国人群中                       接以分子量为标记对样本进行多方位分析，具有位
                                   ［1］
                                                                  点选择灵活、检测结果可靠、检测通量高、检测成本
                的分布尚未见报道，出于研究中国人群HPA1⁃29bw
                多态性分布以及满足患者长期临床治疗效果考虑，                            低的优点    ［14-16］ 。MassARRAY 技术的检测成本远低
                                                                  于 PCR⁃SBT 和 NGS，而检测通量远高于上述 2 个测
                我们在建库中采用HPA1~29bw的分型模式。
                    HPA 数据库的建库规模很大程度上取决于                          序技术，且定制灵活，可以自由选择感兴趣的 SNP
                HPA 系统中 bb 纯合子的基因频率。报道在浙江汉                        位点进行设计，因此从技术性能和卫生经济学的角
                                                                  度，MassARRAY 核酸质谱阵列基因分析系统是最
                族人群中获取1个HPA⁃1系统的bb纯合子，理论上
                                                                  适合血小板供者资料库构建的分型技术。
                                     ［9］
                需要筛查20 408名供者 ，而浙江汉族人群HPA⁃1b
                                                                      本研究采用 12 个插入 HPA⁃1~29w 野生型和突
                                     ［1］
                等位基因频率（0.007 5） 远高于 HPA⁃4b 等位基因
                                                                  变型序列的参考品质粒建立基于MassARRAY 平台
                频率（0.003 0），获取HPA⁃4bb纯合子需要筛查更多
                                                                  的人HPA1⁃29W系统基因分型技术，50例血液基因
                供者。另外，国人在 EMBL 数据库中有极低频率的
                                                                  组DNA样品质谱检测结果表明，其临床灵敏度和特
                                  ［10］
                HPA⁃10bw（0.000 5） ，还在江苏汉族人群中发现
                                                                  异度均为100%，重复检测的一致性均为100%，1次
                1 例国内尚未见报道的HPA⁃11bw，其等位基因频率
                                                                  检测成功率为99.93%，符合预期制定的定制化检测
                比 HPA⁃10bw 更低（结果尚未公开报道），这些低频
                                                                  HPA位点的各项性能指标。综上所述，本研究建立
                HPA对建库库容提出了更高标准，如果考虑ABO血
                                                                  了国内首个基于 MassARRAY 平台、人 HPA1⁃29W
                型抗原、HLA和CD36的因素，血小板捐献者基因型
                                                                  系统基因分型的质谱检测方法，可以为血小板捐献
                资料库的库容必须具备足够大的规模才能够满足临
                                                                  者血型资料库构建工作提供高效和高性价比的
                床需求。据统计，2017年国内血小板献血者HLA和
                                                                  HPA基因分型手段，不仅可以提高输血的疗效和安
                HPA基因型数据库共登记25 240人的分型资料，但
                                                                  全性，减少血小板输注无效的发生，还能够有效降
                                                          ［11］
                当年HLA或HPA基因型配合应用总和仅137例 ，
                                                                  低患者的经济负担、节约宝贵的血液资源。
                其原因之一就是受制于库容这一瓶颈。可以预期未
                来建立血小板捐献者基因型资料库的规模和投入的                           ［参考文献］
                人力物力是相当可观的，因此建库所选择的HPA基                          ［1］ HONG X，CHEN S，YING Y，et al. Simultaneous genotyp⁃
                因分型方法，最好在兼顾检测准确度和检测通量的前                                ing of human platelet alloantigen ⁃ 1 to 28bw systems by
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