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第41卷第4期 金 秋，石永利，林 波，等. 结肠癌中Nup107的表达与临床病理特征及预后的关系［J］.
2021年4月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（04）：580-585 ·581 ·

结肠癌是全球第三常见的恶性肿瘤，2018年新 （Thermo 公司，美国）将 RNA 逆转录为 cDNA。使用
［1］
增病例109.6万并导致50万患者死亡 。手术切除 Power SYBR Green PCR 预混液（Applied Biosystems
和放化疗是早期结肠癌的有效治疗手段，但对晚期 公司，美国）在 QuantStudio 5 实时 PCR 系统上进行
结肠癌患者效果不佳，由于发病隐匿，超过半数的 扩增。实验中使用的引物序列如下：Nup107 上游5 ′⁃
［2］
患者确诊时已为中晚期 。因此，应加大对结肠癌 CACGGACTGCACGGAAACA⁃ 3，下游 5′⁃GAGTTC⁃
癌变关键调控因子的识别，确定新的诊断标志物和 GAGGGATAACCTGGT ⁃ 3′ ；GAPDH 上 游 5′ ⁃ CT⁃
治疗靶点，最终提高结肠癌的治疗效果。 GGGCTACACTGAGCACC⁃3′，下游 5′⁃AAGTGGTC⁃

核孔蛋白（nucleoporin，Nup）是核孔复合物（nu⁃ GTT GAGGGCAATG⁃3′。以 GAPDH 为内参照基因
clear porecomplexes，NPC）的主要成分，它能够调节 分析 Nup107 mRNA 表达，以 2 -ΔΔCt 计算 Nup107 相对
［3］
细胞质和细胞核之间的信号转导 。Nup在许多类 表达量。以上实验重复2次。
型的癌症，如乳腺癌、结肠癌和前列腺癌中过表达， 1.2.3 组织芯片（tissue microarray，TMA）制作
这表明它们可能参与了肿瘤的发生 。Nup107 是 所有组织标本均在4%多聚甲醛固定24 h，常规
［4］
Nup107亚复合物的关键组成部分，位于NPC的中心 石蜡包埋。提前观察结肠组织蜡块，确定典型组织
支架上，是NPC组装和mRNA 输出的关键。目前关 位置。利用 TMAGrand Master（3DHISTECH，匈牙
于Nup107在结肠癌中表达与预后的研究较少。 利）从供体蜡块中钻取核心组织柱，直径1.5 mm，然
本研究检测 Nup107 在结肠癌组织中的表达， 后包埋于受体块中。将受体块切成厚度为 3 μm 的
并证明其与结肠癌患者临床病理特征及预后的 切片，置于含聚赖氨酸涂层的玻片上。
关系，为结肠癌的诊断、预后和靶向治疗提供理 1.2.4 免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）
论依据。 染色
采用 SP 法对结肠 TMA 样本进行 IHC 染色，具
1 对象和方法
体步骤见 Histostain SP 免疫组化染色试剂盒说明
1.1 对象 书。一抗为兔抗人 Nup107 多克隆抗体（Abcam 公
所有参与研究的结肠癌患者于 2012 年 12 月— 司，英国），稀释比例1∶200。IHC结果由2名病理医
2016年5月在南京医科大学附属淮安第一医院接受 师在双盲情况下进行评估。结肠组织中细胞的
活检或手术，共226例。患者年龄32~76岁，平均年 Nup107染色强度被评为0分（阴性）、1分（弱阳性）、
龄 53 岁。手术前患者均未接受化疗或放疗。另选 2 分（中阳性）、3 分（强阳性）。组织最终染色得分=
取 38 例正常结肠组织作为对照。纳入研究的患者 （3×强染色细胞百分比+2×中度染色细胞百分比+1×
临床病理资料包括性别、年龄、肿瘤位置、组织学类 弱染色细胞百分比）×100，最终染色评分范围 0~
型、分化、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、美国癌 300。根据结肠癌患者的生存预后情况，使用 X⁃tile
症协会（American Joint Committee on Cancer，AJCC） 软件将Nup107表达情况分为高表达和低或无表达，
分期、Ki67 表达。本研究获得了南京医科大学伦理 计算出截断值为115。
委员会的批准和患者的知情同意。 1.2.5 基因集富集分析（gene set enrichment analy⁃
1.2 方法 sis，GSEA）
1.2.1 Ualcan检索 检索 TCGA 数据库，获取结肠癌患者转录组测
Ualcan（http：//ualcan.path.uab.edu/index.html）是 序数据。使用 GSEA v2.2.2 软件进行分析。根据
一个有效的癌症数据在线分析和挖掘的网站，主要 Nup107 mRNA 中位表达水平将样本分为高表达组
是基于 TCGA 数据库中的相关癌症数据进行分析。 和低表达组进行比较，根据分子标签数据库中的
本研究分析比较了41例正常结肠组织和286例结肠 KEGG 基因集定义功能基因集。P＜0.05 且 FDR＞
癌组织的mRNA表达情况。 0.25为有统计学意义。

1.2.2 实时定量聚合酶链反应（quantitative real⁃ 1.3 统计学方法
time PCR，qRT⁃PCR） 所有数据均在 SPSS 18.0 软件上进行分析。计
使用TRIzol Plus RNA 纯化试剂盒（Invitrogen公 量资料以均值±标准差（x ± s）表示，采用成组t 检验
司，美国）从 19 对新鲜结肠癌和癌旁正常组织中提 比较两独立研究组间均数。对例数和率的比较采
取总RNA。使用High⁃Capacity cDNA 逆转录试剂盒 用 Pearson χ 检验，计算 Nup107 与临床病理特征的
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