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第41卷第5期             汤泽华，朱文卿，邱 憬. Ag2S@BSA存储液对纯钛表面成骨细胞行为的影响［J］.
                  2021年5月                     南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（05）：670-676                       ·671 ·


                    纯钛具有优异的理化性能、良好的生物相容性                          水溶液可用于钛种植体的储存，为开发新的种植
                及骨整合潜能，是口腔种植体最常用的材料之一。                            体存储液提供不同的思路。本研究制备一种 BSA
                钛表面的理化特性决定了能否快速建立牢固的骨结                            包裹的 Ag2S 种植体存储液，评估 Ag2S@BSA 存储液
                合，国内外学者已经对钛种植体的表面处理进行了诸                           对钛表面特性和成骨细胞生物学行为的影响。
                多尝试，以期提高成骨速度，增加骨结合强度                   ［1-4］ 。已
                                                                  1  材料和方法
                有文献报道，纯钛表面和修饰改性钛表面均存在时
                间依赖的生物活性老化现象 。课题组前期研究发                            1.1  材料
                                         ［5］
                现，纯钛表面的二氧化钛表层会吸附空气中的碳氢                                商用纯钛（99.5%，宝鸡钛业），砂纸（天津南
                化合物形成碳累积，且碳累积量与钛表面亲水性呈                            景），氯化钠、乙酸银、硫化钠、氢氧化钠（分析纯，上
                              ［6］
                显著的负相关性 。老化钛表面生物相容性的降低                            海国药），BSA（南京生兴生物），扫描电子显微镜
                可能与表面亲水性的减弱有关，新制备的钛表面具                           （MAIA3 RISE，Tescan 公司，捷克），X 射线能谱仪
                有超亲水性，随着时间的延长逐渐转变为疏水性，                           （ULTIM EXTREME，Oxford公司，英国），标准型光学
                成骨细胞黏附、扩散、增殖和碱性磷酸酶活性均呈                            接触角仪（SL200B，科诺公司，美国），小鼠 MC3T3⁃
                时间依赖性降低       ［7-8］ 。动物实验表明，在早期愈合阶                E1细胞系（上海中科院细胞库），α⁃MEM、FBS、青⁃链
                段，存放 4 周后植入的钛种植体周围骨覆盖率不足                          霉素双抗、胰酶（Gibco公司，美国），鬼笔环肽（Cyto⁃
                新鲜表面的50% 。                                        skeleton 公司，美国），DAPI 、CCK⁃8、RIPA 裂解液
                              ［9］
                    为了延缓钛种植体表面的生物活性老化，提高                         （上海碧云天），BCA试剂盒（南京凯基生物），碱性磷
                钛表面的骨结合效率，钛种植体存储媒介的优化已                            酸酶测试盒（南京建成），细胞恒温培养箱（Thermo公
                成为研究热点。国内外研究已提出了多种抗老化                             司，美国），多功能酶标仪（Spectramax 190，MD公司，
                方法，如紫外光功能化、盐溶液浸泡、等离子体处                            美国），激光共聚焦显微镜（CLSM710，Zeiss公司，德
                理、低真空存储等        ［10-11］ 。其中，盐溶液最为方便、经             国），化学发光凝胶成像系统（上海天能5200）。
                济。有文献报道生理盐水存储可以减少钛表面碳                             1.2  方法
                累积，改善钛表面的亲水性，促进成骨细胞的黏附、                           1.2.1 存储液及试件制备
                扩散和增殖，提高Ⅰ型胶原表达和钙沉积水平                      ［12］ 。      存储液的制备：Ag2S@BSA 存储液的制备：定量
                临床中已经运用生理盐水进行种植体存储，如 ITI⁃                         称取乙酸银、硫化钠和BSA，双蒸水依次溶解配制为
                Slactive 亲水性种植体。但在种植区骨量不足或骨                       0.01 mol/L乙酸银溶液、0.1 mol/L硫化钠溶液和20 g/L
                质条件差的情况下，开发具有更强骨诱导活性的种                            BSA溶液。将乙酸银溶液与BSA溶液以适量体积混
                植体存储液势在必行。                                        合，所得混合液调节 pH 至碱性后与硫化钠溶液以
                    近年来，蛋白包裹的近红外硫化银（Ag2S）量子                       适量体积混合得到Ag2S@BSA存储液。生理盐水存
                点因其良好的生物相容性及在生物介质中良好的                             储液制备：定量称取氯化钠粉末，双蒸水稀释为
                分散性被广泛应用于生物成像领域                 ［13］ 。有学者以        0.9%的氯化钠溶液。BSA 存储液制备：定量称取
                牛血清白蛋白（boviaue serum albumin，BSA）为稳定              BSA粉末，双蒸水稀释为5 g/L的BSA溶液。
                剂，在水溶液中制备纳米银材料，可形成稳定的分                                试件制备：纯钛片经砂纸打磨抛光，超声清洗
                散体，在纳摩尔范围内产生最佳抗菌活性，且远低                            并干燥后备用。将纯钛试件随机分为 4 组，分别密
                于体外测定的成骨细胞毒性浓度，合成的纳米银颗                            闭保存于空气（Air）、生理盐水（Saline）、BSA 溶液、
                粒可作为生物材料或药物产品的添加剂，分散在水                            Ag2S@BSA 溶液中 2 周后观察钛片表面特性及成骨
                溶液中，或涂覆于不同材料表面              ［14］ 。Zhou等 ［15］ 研究   细胞的生物学行为。
                发现，包裹纳米银颗粒的丝纤蛋白基涂层具有良好                            1.2.2 钛表面特性分析
                的蛋白吸附性、亲水性和持久的抗菌性能。体外                                 4组钛片在不同介质中保存2周后，晾干后使用
                研究表明，该涂层不仅能够促进细胞附着、扩散和                            扫描电镜（scanning electron microscope，SEM）观察
                增殖，还能增强碱性磷酸酶表达、胶原分泌和矿                             试件的表面微形貌，X 线能谱仪（energy dispersive
                化。体内研究显示，具有骨架结构的涂层显著改                             spectrometer，EDS）分析 4 种介质中存储 2 周后的试
                善了新生骨的生成以及软组织结合，有助于形成                             件表面元素分布情况。随机选取4种介质中存储2周

                快速而持久的骨整合。由此推测蛋白包裹的 Ag2S                          后的试件各 3 枚，接触角仪测量钛片的接触角及表
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