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第41卷第6期 胡丽萍，肖轶婧，唐子春，等. 人羊膜间充质干细胞培养上清通过环状RNA⁃0001649/miR⁃203a/VEGFA/
                  2021年6月        MMP9信号通路促进血管生成［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（06）：810-816 ·815                 ·


                能是miR⁃203a的靶基因。为了验证circ⁃0001649是                  管生成耦合过程        ［22］ ；circ⁃002136 通过与 miR⁃138⁃5p
                否通过结合 miR⁃203a 发挥作用，对 circ⁃0001649 敲              结合缓解对转录因子SOX13的抑制，促进SPON2表
                低的HUVEC细胞中分别转染miR⁃203a抑制剂miR⁃                     达进而调控胶质瘤血管生成              ［23］ ；circ⁃0003204 通过
                203a⁃inhibitor 和对照 inhibitor⁃NC 来进行拯救实            促进E⁃cadherin表达，降低N⁃cadherin和Vimentin的
                验。qRT⁃PCR检测结果显示转染miR⁃203a⁃inhibitor               表达进而抑制氧化修饰低密度脂蛋白诱导的血管
                后并不影响 circ⁃0001649 的敲低效率（图 2C），但是                 内皮细胞增殖和血管生成等。本研究探讨了 cir⁃
                与 inhibitor⁃NC 相比，转染miR⁃203a⁃inhibitor却能部         cRNA 在促血管生成过程中的作用。结果表明，
                分逆转circ⁃0001649敲低引起的成管和迁移能力的                      hAMSC⁃CM 可显著上调 HUVEC 中 circ⁃0001649 的
                降低（图2D、E、F）。同时与此一致的是，蛋白印迹实                        表达。此前其他研究表明circ⁃0001649可通过与多
                验结果同样显示：miR⁃203a⁃inhibitor能部分恢复因敲                 个miRNA结合进而抑制肝细胞癌进展，在视网膜母
                低circ⁃0001649而引起的VEGFA和MMP9蛋白水平                   细胞瘤中 circ⁃0001649 的下调与其不良预后有关，
                的下降（图2G）。以上实验证实了hAMSCs⁃CM的促                       并通过 AKT/mTOR 信号通路调控细胞增殖和凋

                血管生成作用可部分通过上调 HUVEC 细胞内 circ⁃                     亡。本研究通过生物信息学分析和拯救实验，发现
                0001649的表达来实现，circ⁃0001649与miR⁃203a存              circ⁃0001649 可通过与 miR⁃203a 结合上调 VEGFA、
                在内源性竞争，促进下游VEGFA和MMP9表达。                          MMP9的表达进而发挥促血管生成因子的作用。然
                                                                  而，hAMSC⁃CM 上调 HUVEC 中 circ⁃0001649 表达的
                3  讨 论
                                                                  具体机制尚不清楚。推测可能是 hAMSC⁃CM 中含
                    由于先天性原因和后天的外伤、肿瘤、炎症，颌                         有的一些生长因子和细胞因子进入 HUVEC 中，通
                骨缺损在临床中较为常见。其不仅可以导致咀嚼                             过一系列信号转导，促进 circ⁃0001649 转录。这些
                及语言功能障碍，还可导致颅颌面畸形，从生理、心                           还需要通过后续实验进一步研究。
                理两方面对患者造成严重影响。近年来出现了一                                 综上，本研究表明circ⁃0001649参与了hAMSC⁃
                种新型的材料——组织工程化骨，给治疗颌面部骨                            CM 诱导的 HUVEC 的血管生成。这种促血管生成
                缺损提供了新的思路。组织工程化骨通过采取合                             作 用 可 能 是 部 分 通 过 上 调 HUVEC 细 胞 内 circ ⁃
                适的支架材料复合生物活性分子及种子细胞，于体                            0001649 表达来实现的，circ⁃0001649与miR⁃203a内
                外构建结构功能与自然骨相近的组织工程材料。                             源性竞争，促进下游VEGFA和MMP9表达。本研究
                    促进血管生成是促进骨再生及构建组织工程                           为探究 hAMSC 促进血管新生的作用机制提供了新
                化骨的重要策略，因为骨的愈合或重塑都需要新生                            思路。
                血管来提供氧和营养物质以维持正常代谢。通过                            ［参考文献］
                干细胞促进血管新生已被认为是一种潜在的解决
                                                                 ［1］ FRÖHLICH L F. Micrornas at the interface between osteo⁃
                方案  ［20］ 。既往研究表明，骨髓间充质干细胞分泌多
                                                                       genesis and angiogenesis as targets for bone regeneration
                种相关生长因子和细胞因子，如VEGF、胰岛素样生
                                                                      ［J］. Cells，2019，8（2）：121
                长因子1、肝细胞生长因子等，以旁分泌方式促进骨                          ［2］ SATIJA N K，SINGH V K，VERMA Y K，et al. Mesenchy⁃
                再生过程中的血管新生           ［21］ 。但骨髓间充质干细胞                   mal stem cell⁃based therapy：a new paradigm in regenera⁃
                在促进血管新生的应用中受到以下因素的限制：需                                 tive medicine［J］. J Cell Mol Med，2009，13（11/12）：
                要一定的侵入性操作，可能对供者产生一定损伤，                                 4385-4402
                以及供体年龄依赖性分化导致的不稳定性。于是                            ［3］ TAKEUCHI R，KATAGIRI W，ENDO S，et al. Exosomes
                较容易获得、稳定性较好、且涉及伦理问题较少的                                 from conditioned media of bone marrow⁃derived mesen⁃
                hAMSC具有更好的应用前景。同样，本课题组之前                               chymal stem cells promote bone regeneration by enhanc⁃
                                                                       ing angiogenesis［J］. PLoS One，2019，14（11）：e0225472
                的数据显示，hAMSC 能明显增强 HUVEC 的血管生
                                                                 ［4］ ILANCHERAN S，MOODLEY Y，MANUELPILLAI U.
                成 。
                 ［5］
                                                                       Human fetal membranes：a source of stem cells for tissue
                    近年来circRNA由于其在血管新生中发挥重要
                                                                       regeneration and repair?［J］. Placenta，2009，30（1）：2-10
                作用而备受关注。例如 circRNA hsa_circ_0074834              ［5］ TANG Z，WU X，HU L，et al. Circ⁃100290 positively regu⁃
                通过作为 miR⁃942⁃5p 的 ceRNA 进而增加 ZEB1 和                    lates angiogenesis induced by conditioned medium of hu⁃
                VEGF 的表达来促进骨髓间充质干细胞的成骨⁃血                               man amnion⁃derived mesenchymal stem cells through miR
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