Page 42 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第7期
·972 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年7月
表1 大鼠源引物序列
Table 1 Sequence of rat derived primers
基因名称 上游引物（5′→3′） 下游引物（5′→3′）
TLR1 CAGTTTCTGGGATTGAGCGGTT TAATGTGCTGAAGACACTTGGGATC
TLR2 GGAGGTCTCCAGGTCAAATCT ATTCCGCTGGACTCCAATGT
TLR3 ATTGGCAAGTTATTCGTCCTCCTC AGAGATTCTGGATGCTTGTGTTTGA
TLR4 CTGGTGGCTGTGGAGACAAA AAGGCTTGGGCTTGAATGGA
TLR5 GCTCCGTGCCTTGGACATAAC TAGCAGTGAATTGGGGTACATGC
TLR6 CAACCTTATTGAATCTGACCCTCC CCCTGCTTATGCTCTCAGTTATCG
TLR7 TCCTTGGGTTTCGATGGTATCCT AGAGATGCTTGGTATGTGGTTGATG
TLR8 GAGACTCTGACACGCTTGGACTTAT AGCACATGAAGGTGAGGAAAATACT
TLR9 CTGGTGCTGAAGGACAGTTCTCTC GCTGGTTTTGTTGATGCTCTCGTA
TLR11 CTGGAGTCTTGGGCTACACG TTATCAGCAGAAGCAGCAGGGAG
IL⁃6 CCACTTCACAAGTCGGAGGCTTA GTGCATCATCGCTGTTCATACAATC
TNF⁃α CCAGACCCTCACACTCAGATCA GGAGGCTGACTTTCTCCTGGTA
IL⁃1β AGCTTCAGGAAGGCAGTGTC TCAGACAGCACGAGGCATTT
β⁃actin CACCCGCGAGTACAACCTTC GGTGTGATGGTGGGTATGGG
DAPI 染核，显示蓝色荧光。Merge 为两者的合并 2.2 METH对小胶质细胞的激活作用
图。小胶质细胞的纯度=IBA⁃1阳性细胞/DAPI核染 为探究 METH 对小胶质细胞的激活作用，用
细胞×100%。随机计数10个视野下的IBA⁃1标记小 300 μmol/L 的 METH 处理原代小胶质细胞 15 min、
胶质细胞数与DAPI 标记总细胞数，结果显示，按照 30 min、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h，观察原代小胶质特
本实验室分离培养小胶质细胞的方法，小胶质细胞 异性激活标志蛋白IBA⁃1的表达情况。如图2所示，
纯度达到95%以上，符合后续实验要求。 IBA⁃1表达在METH处理30 min后开始上升，并在1 h
IBA⁃1 DAPI Merge
图1 小胶质细胞的鉴定与纯度分析（×200）
Figure 1 Microglial identification and purity analysis（×200）
METH（300 μmol/L） 2.0 **
对照组 15 min 30 min 1 h 3 h 6 h 12 h 24 h 1.5 * * ** *
IBA⁃1/β⁃actin 1.0
IBA⁃1 17 kDa
β⁃actin 43 kDa
0.5
0
对照组 15 min 30 min 1 h 3 h 6 h 12 h 24 h
METH（300 μmol/L）
与对照组相比，P < 0.05，P < 0.01，n=3。
*
**
图2 METH对原代小胶质细胞的激活情况
Figure 2 Activation of primary microglia induced by METH
