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第41卷第7期
               ·974 ·                            南 京    医 科 大 学 学         报                        2021年7月


                                      METH（300 μmol/L）                    3
                            对照组  15 min  30 min  1 h  3 h  6 h  12 h  24 h      **  ***  ***
                                                                         p⁃NF⁃κB/NF⁃κB
                     p⁃NF⁃κB                           65 kDa             2               **


                      NF⁃κB                            65 kDa             1

                      β⁃actin                          43 kDa             0
                                                                          对照组  15 min  30 min  1 h  3 h  6 h  12 h  24 h

                                                                                   METH（300 μmol/L）
                                            与对照组相比，P < 0.05，P < 0.01， P < 0.001（n=3）。
                                                      *
                                                                    ***
                                                             **
                                               图5 METH对NF⁃κB通路激活的影响
                                           Figure 5 Effects of METH on NF⁃κB activation
              统毒性   ［7-8］ 。METH的神经毒性作用机制十分复杂，                   刺激，TLR 表达的增加随后通过信号转导来上调炎
              主要包括兴奋性毒性、线粒体损伤、氧化应激、小胶                           性因子mRNA的表达。NF⁃κB作为炎性反应中的关
              质细胞炎症反应等 。目前，METH 诱导的小胶质                          键转录因子，在小胶质细胞激活导致的神经炎性的
                               ［9］
              细胞炎性反应是METH神经毒性的研究热点。小胶                           发生过程中发挥重要作用。因而，本研究探讨了参
              质细胞是中枢神经系统的主要炎性细胞，在保护大                            与 TLR 诱导炎性因子表达的下游信号通路 NF⁃κB
              脑的完整性和维持大脑平衡中发挥重要作用。正                             的激活情况。在中枢神经系统中，NF⁃κB 信号通路
              常情况下，小胶质细胞处于静止状态，但当受到损                            可参与多种神经退行性疾病进程。一些研究表明，
              伤或感染时，小胶质细胞被激活。持续激活的小胶                            NF⁃κB的激活是促炎性细胞因子表达调控的关键步
              质细胞会释放各种促炎细胞因子，如TNF⁃α、IL⁃1β、                      骤，活化后的 NF⁃κB 转移到核内与其相关 DNA 基
              IL⁃6，导致神经元细胞死亡         ［10］ 。本实验结果显示，原            序结合以诱导炎性因子基因的转录                  ［13-14］ 。这些结
              代小胶质细胞暴露在 METH 30 min 后，IBA⁃1 蛋白                  果支持了本研究中METH暴露激活原代小胶质细胞
              的表达明显升高；处理24 h后，炎性因子TNF⁃α、IL⁃                     内NF⁃κB的结果，提示NF⁃κB参与了TLR 诱导炎性
              1β、IL⁃6 的 mRNA 水平明显升高，上述结果提示，                     因子的表达。
              METH 暴露明显激活小胶质细胞，且促进小胶质细                               本研究揭示了TLR/NF⁃κB信号通路参与METH
              胞中炎性因子 TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6 mRNA 的高表                  诱导的原代小胶质细胞的激活及其炎性因子表达
              达。然而，目前 METH 诱导小胶质细胞炎症反应的                         的过程，后续将进一步对TLR/NF⁃κB信号通路之间
              机制并不完全明了。因而，本研究探讨 METH 激活                         的信号传递蛋白进行深入研究，以期为 METH 神经
              小胶质细胞可能的上游信号通路。                                   毒性的干预提供潜在靶点。
                  TLR 是模式识别受体，在生物体中广泛存在。                        ［参考文献］
              哺乳动物中至少存在13个TLR基因，TLR1~9在小鼠
                                                                ［1］ KRASNOVA I N，CADET J L. Methamphetamine toxicity
                                                         ［11］
              和人类中均表达，而TLR10~13仅在小鼠中表达 。
                                                                     and messengers of death［J］. Brain Res Rev，2009，60
              研究表明，TLR 在神经元、小胶质细胞、星形胶质细                             （2）：379-407
              胞、少突胶质细胞和神经干细胞中都有表达                    ［12］ 。小    ［2］ 程    洁，蒋   雷，环   飞，等. 甲基苯丙胺对大鼠小胶质
              胶质细胞表达多种 TLR，该家族受体在小胶质细胞                               细胞的损伤及炎性相关基因表达的影响［J］. 南京医科
              的免疫反应中发挥重要作用，是识别细菌或病毒感                                 大学学报（自然科学版），2017，37（9）：1131-1135，1181
              染的第一道防线，并促进各种炎症介质的产生。在静                           ［3］ XU E，LIU J，LIU H，et al. Inflammasome activation by
              止的小胶质细胞中几乎无法检测到TLR的表达，但一                               methamphetamine potentiates lipopolysaccharide stimula⁃
                                                                     tion of IL⁃1β production in microglia［J］. J Neuroimmune
                                                      ［11］
              旦小胶质细胞被激活，就会迅速表达多种TLR 。本
                                                                     Pharmacol，2018，13（2）：237-253
              实验中，通过 real⁃time PCR 检测 METH 激活的小胶
                                                                ［4］ EMSLEY H C，APPLETON R E，WHITMORE C L，et al.
              质细胞内TLR 家族成员mRNA 的水平变化，我们发
                                                                     Variations in inflammation⁃related genes may be associat⁃
              现 TLR2~5、7~9、11 的 mRNA 表达显著增加。提示                       ed with childhood febrile seizure susceptibility［J］. Sei⁃
              小胶质细胞可能通过上调多种TLR来响应METH的                               zure，2014，23（6）：457-461
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