Page 49 - 南京医科大学学报自然科学版
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第41卷第7期 吴 春,张小梅,向 阳,等. GDF15激活ERK/Bcl⁃2通路增强BM⁃MSCs放射抗性[J].
2021年7月 南京医科大学学报(自然科学版),2021,41(07):976-983,991 ·979 ·
A 8.0 ** C DAPI GDF15 Merge
mRNA的相对表达量 6.0 ** ** 未放射
4.0
GDF15 2.0 0 *
0 h 2 h 4 h 8 h 24 h
B
0 h 2 h 4 h 8 h 24 h
GDF15 25 kDa
h
放射后8
β⁃actin
43 kDa
2.5
GDF15蛋白相对表达量 2.0 * **
**
1.5
1.0
0.5
0 h 放射后24
0 h 2 h 4 h 8 h 24 h
50 μm
A:RT⁃qPCR检测9 Gy放射后细胞GDF15的mRNA表达水平;B:Western blot检测9 Gy放射后细胞GDF15蛋白水平;C:免疫荧光染色检测
9 Gy放射后细胞GDF15蛋白表达(×400)。两组比较,P ˂ 0.05,P ˂ 0.01(n=3)。
*
**
图1 BM⁃MSCs经放射后GDF15的表达情况
Figure 1 The expression of GDF15 in BM⁃MSCs after irradiation
A 1.5 * B C 1.5 * *
干扰片段2组
mRNA相对表达量 1.0 * * GDF15 干扰对照组 干扰片段1组 干扰片段3组 GDF15蛋白相对表达量 1.0 *
25 kDa
0.5
GDF15 0.5 0 β⁃actin 43 kDa 0
干扰对照组 干扰片段1组 干扰片段2组 干扰片段3组 干扰对照组 干扰片段1组 干扰片段2组 干扰片段3组
A:RT⁃qPCR检测细胞转染24 h后GDF15 mRNA水平;B:Western blot检测细胞转染72 h后GDF15蛋白水平;C:Western blot灰度值统计结
果。两组比较,P ˂ 0.05(n=3)。
*
图2 RT⁃qPCR和Western blot验证GDF15干扰效果
Figure 2 The interference effect of GDF15 in BM⁃MSCs were detected by RT⁃qPCR and Western blot
染色检测细胞周期,结果显示,未放射条件下,干扰 GDF15几乎不影响未放射时的细胞增殖活力,却可
GDF15 对 BM⁃MSCs 周期无明显影响;放射后 24 h 导致放射后 BM⁃MSCs 细胞增殖活力显著降低(P ˂
时,干扰 GDF15 组 G2 期比例显著增加(P ˂ 0.05,图 0.01,图3C)。综上所述,干扰GDF15基因表达可导
3A、B)。收取放射3 d后的细胞,CCK⁃8法检测细胞 致放射后BM⁃MSCs细胞G2期阻滞并且降低细胞增
增殖活力,结果显示与细胞周期结果相符,干扰 殖活力。