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第41卷第7期       王  维，朱海艳，郑亚斐，等. 生后早期高氧暴露对卵清蛋白诱导支气管哮喘模型小鼠的影响［J］.
                  2021年7月                     南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（07）：984-991                       ·985 ·


                Conclusion：Early postnatal hyperoxia exposure can aggravate the airway inflammation of ovalbumin induced asthma mice，airway
                structure remodeling is obvious，but the lung injury is reduced.
               ［Key words］ bronchial asthma；hyperoxia；cytokines；murine
                                                                              ［J Nanjing Med Univ，2021，41（07）：984⁃991］





                    支气管哮喘（哮喘）是儿童最常见的慢性呼吸道                         随机分为 4 组：空气+PBS 组、高氧+PBS 组、空气+
                        ［1］
                疾病之一 。我国目前儿童哮喘患者约有3 000万，                         OVA组和高氧+OVA组，每组8只。
                且患病率正呈现快速上升趋势 。哮喘的致病可追                            1.2.2 生后早期高氧暴露
                                           ［2］
                溯到婴幼儿期，70%~80%的儿童哮喘发病于 5 岁以                           高氧+PBS组及高氧+OVA组新生小鼠出生后4 h
                前 。文献报道早产 、生后氧疗及支气管肺发育不                           内置于 65 cm×45 cm×70 cm 自制密闭塑料氧箱［氧
                  ［3］
                                  ［4］
                良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）与儿童哮喘的           浓度分数（FiO2 ）≥95%，由氧气瓶持续供氧，氧流量
                发生有关。儿童哮喘以咳嗽、喘息、肺部炎症和气道                           3~4 L/min］中，由FO⁃2型氧浓度测定仪持续监测，连
                高反应性（airway hyperresponsiveness，AHR）为主要           续暴露7 d；空气+PBS组及空气+OVA组新生小鼠则
                特征，而早产儿，尤其是患有BPD的早产儿也经常出                          饲养于同环境室内空气（FiO2=21%）中。每日开箱
                现类似哮喘的反复喘息、气道阻塞和AHR等症状                    ［5-6］ ，  1 h，记录小鼠体重，补充饮水和饲料，更换垫料，并

                其肺功能检查主要表现为1秒用力呼气容积（forced                        将空气组母鼠与高氧组母鼠轮换，以防止母鼠氧中
                expiratory volume in one second，FEV1 ）和第 1 秒用力    毒。7 d 后将高氧+PBS 组及高氧+OVA 组小鼠移出
                呼气量占用力肺活量的百分比（FEV1/FVC）降低 ，由                      氧箱，与空气+PBS组及空气+OVA 组小鼠一同饲养
                                                         ［7］
                                         ［8］
                此被诊断为哮喘的风险增加 ，但具体原因并不清                            于室内空气中，待其6周龄后以OVA 诱导支气管哮
                楚。早产儿及 BPD 患儿生后经常需要氧气支持治                          喘模型。
                疗，已有动物研究证实新生小鼠早期高氧暴露可损害                           1.2.3 OVA诱导支气管哮喘模型的建立
                                                         ［9］
                                                                                     ［10］
                小鼠的气道发育，造成气道炎症和AHR的增加 ，而                              参照文献的方法 ，于第43日龄、50日龄、57日
                这与哮喘的发病密切相关。本实验即利用BALB/c小                         龄分别给予空气+OVA组与高氧+OVA组新生小鼠腹
                鼠在生后早期高氧暴露基础上建立卵清蛋白（ovalbu⁃                       腔注射混悬致敏液［OVA 1 mg/mL+Al（OH） 31 mg/mL］
                min，OVA）诱导的支气管哮喘小鼠模型，并将之与单                        100 μL 进行致敏；空气+PBS 组及高氧+PBS 组新生
                纯哮喘模型进行比较，以研究生后早期高氧暴露对                            小鼠腹腔注射等量PBS。于新生小鼠第58日龄起，
                OVA诱导的支气管哮喘模型小鼠的影响。                               将空气+OVA 组与高氧+OVA 组新生小鼠分别置于
                                                                  雾化箱中，雾化吸入激发液（1% OVA）予以激发，连
                1  材料和方法
                                                                  续7 d，每次30 min；空气+PBS组及高氧+PBS组用等
                1.1  材料                                           量PBS雾化吸入替代。
                    自南京医科大学医药动物实验中心购入出生                           1.2.4 标本采集
                时间相差 30 min 以内的新生 BALB/c 小鼠（SPF 级）                    小鼠于第65日龄用10%水合氯醛0.04 mL/10 g
                32只，饲养于南京医科大学附属淮安第一医院动物                           腹腔注射麻醉，固定四肢，剪开皮肤暴露胸腔，1 mL
                实验中心，环境温度恒定（24±2）℃，相对湿度 60%~                      注射器肝素冲管抗凝后心尖部取血，1 600 g 离心
                70%，昼夜光照各 12 h，自由饮水及采食，饮水及饲                       10 min后留取血清。继续解剖，分离暴露气管，由气
                料由动物中心提供。为减少性别对本组研究的干                             管上1/3处置入1 mL 注射器针头并固定，抽取1 mL
                扰，参照文献全部选用雌性小鼠。实验所需FO⁃2型                          无菌生理盐水对气管、支气管及肺泡进行灌洗，反
                氧浓度测定仪购自无锡法斯达医学设备有限公司，氧                           复抽吸3次，保证回收率在75%以上，回收的支气管
                气由淮安圣泰气体有限公司提供。本实验经南京医                            肺 泡 灌 洗 液（broncho alveolar lavage fluid，BALF）
                科大学附属淮安第一医院医学伦理委员会批准。                             4 000 r/min 离心后分离上清与沉淀，沉淀立即进行

                1.2  方法                                           白细胞分类计数，上清置于-80 ℃等待进行细胞因
                1.2.1 动物分组                                        子检测。灌洗结束后留取右肺中叶进行肺组织病
                    32 只雌性 BALB/c 新生小鼠，记录出生体重后                    理检查。
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