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第41卷第7期 马 佩，方 圆，查全斌，等. 长链非编码RNA LINC01197调节胃癌进展的机制研究［J］.
2021年7月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（07）：992-998，1014 ·993 ·

胃癌是当前严重威胁人类健康的恶性肿瘤之 显影液（苏州新赛美生物科技有限公司），PAGE凝胶
一。2018 年全球胃癌新发病例 1 810 万，居恶性肿 快速制备试剂盒（上海雅酶生物科技有限公司），Li⁃
瘤第 5 位；新发死亡病例 960 万，居恶性肿瘤第 3 pofectamine 3000（Termo Fisher 公 司 ，美 国 ），
位。东亚地区是全世界胃癌发病率最高的地区，远 LINC01197 干 扰 RNA（shLINC01197）及 阴 性 对 照
远超过第 2 位。而我国作为东亚地区最大的国家， （NC）序列由上海吉玛公司合成。
胃癌防控形势严峻。据《中国肿瘤登记年报 2018》 1.2 方法
报道，2014 年全国胃癌发病率为 19.8/10 万，居恶性 1.2.1 生物信息学分析

肿瘤第 2 位；死亡率为 13.5/10 万，居恶性肿瘤第 3 GEPIA 数据库（Gene Expression Profiling Inter⁃
位。国家癌症中心预测 2020 年我国胃癌发病率将 active Analysis，http：//gepia.cancer⁃pku.cn/）是一个研
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高达24.3/10万 。 究人类各种类型肿瘤及正常组织 RNA 测序数据的
近年来，随着分子生物学、消化内镜和医学影 数据库，其整合了 TCGA（The Cancer Genome Atlas）
像、医学病理等技术的发展和健康意识的提升，早 和GTEx（The Genotype⁃Tissue Expression）等数据库，
期胃癌的诊断和治疗有了很大的改善，但是，靶向 可以对肿瘤的基因表达、病理类型、患者生存期等各
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药物、免疫检查点抑制剂等新型药物的临床应用并 方面进行高效、专业的分析 。基于GEPIA数据库，
未明显改善进展期胃癌的总体预后，进展期胃癌的 我们选取408个胃癌组织样本和211个正常胃部组织
诊治仍是一个难点。侵袭和转移是导致晚期胃癌 样本，分析LINC01197在胃癌组织中的表达情况，同
［2］
患者死亡的主要原因 。因此，研究胃癌的发生及 时，按照 Kaplan ⁃ Meier Plotter（KM plotter）数据库
侵袭、转移机制有助于胃癌的早期诊断、靶向治疗 （http ：//kmplot.com/analysis/index.php?p=service&ca⁃
及改善预后，从而提高患者生存率。 ncer=gastric）中LINC00197的表达量中位数，将胃癌
长链非编码RNA（long non⁃coding RNA，lncRNA） 患者分为高表达组和低表达组，进行预后研究。
是长度超过 200 bp 的非编码 RNA。近来研究发现 1.2.2 细胞培养
它们能通过调控基因转录、RNA的剪接等方式参与 人胃癌细胞株 SGC⁃7901、BGC⁃823、MGC⁃803、
肿瘤等多种重大疾病进展 ［3-7］ 。 LINC01197 是被发 AGS及人胃黏膜上皮细胞GES⁃1均购自中国科学院
现的 lncRNA 之一，其位于 15q26.2，长度为 1 445 个 典型培养物保藏委员会细胞库，传代培养于低糖生
碱基。研究发现，LINC01197与胰腺癌进展相关，其 长液RPMI1640中，生长于提供37 ℃和5% CO2环境
低表达提示胰腺癌患者预后差，并且 LINC01197 的 的培养箱。取对数生长的细胞用于后续实验。
低表达可通过 Wnt/β⁃catenin 信号通路调控抑制胰 1.2.3 RNA提取和实时荧光定量PCR（qPCR）
腺癌细胞增殖 ［8-9］ 。那么，LINC001197 在胃癌等其 用 TRIzol 提取 RNA，使用 Prime Script RT Mas⁃
他消化系统肿瘤中有什么作用？本研究通过生物 ter Mix 反转录试剂盒将 RNA 逆转成 cDNA，并按照
信息学分析发现 LINC01197 在胃癌组织中高表达， qPCR反应体系配制反应溶液，加入荧光定量用384
并通过敲低胃癌细胞中 LINC01197 的表达，进一步 孔板中，ABI 7900HT Real⁃Time PCR System 7900 高
. 探讨 LINC01197 对胃癌细胞增殖、侵袭与转移能力 通量快速实时荧光定量 PCR 仪收纳 384 板进行

的影响，并对可能的分子机制进行初步探究。 PCR。程序包括预变性和循环。收集并处理数据，
结果用2 -ΔΔCt 法计算。qPCR引物见表1。
1 材料和方法
1.2.4 细胞转染
5
5
1.1 材料 取生长活跃的细胞 2×10 ~4×10 个接种至 6 孔
BLAB/c 裸鼠购自北京维通利华。本研究经江 板中，生长 24 h。按照 Lipofectamine 3000 说明书进
苏 大 学 附 属 金 坛 医 院 伦 理 委 员 会 批 准（编 号 行转染，6 h 后换液。干扰片段序列如下：阴性对照
2020001）。RPMI 1640细胞培养基、PBS、胰酶、青链 （NC）5′⁃ GTTCTCCGAACGTGTCACGT ⁃3′，干扰片段
霉素、胎牛血清（Gibco 公司，美国），二甲基亚砜、甲 1（shLINC01197⁃1）5′⁃GGTCGTACTTCTCCATGTTCT⁃

醇、吐温⁃20、氯仿、异丙醇、无水乙醇（Sigma⁃Alrich 3′ ，干 扰 片 段 2（shLINC01197 ⁃ 2）5′ ⁃ GGACATA⁃
公司，美国），Cell Counting Kit 8（CCK⁃8）细胞增殖检 AAGTTCCTGGTTGA⁃3′。
测试剂盒、PMSF、BCA 蛋白定量试剂盒、结晶紫染 1.2.5 细胞增殖实验
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液、DEPC水（上海Beyotime生物技术有限公司），ECL 取对数生长期细胞1×10 个，制成单细胞悬液，