Page 16 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第8期
·1118 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年8月

A B
Slo35d3 Ecl8
Zfp113
C1qc Epha7
Nefl1
0 5 10 15 20
Egr3
Sema3c Calb2 Camk4
Oas1a
Fxyd7
Hmox1 Syep1
Atp2b4 Gsta1
Cadm2
Fos Ptgs2
Camk4
Myo5c Klf4 Fa2h
Kcnj10 Ephx2
Oas1
Cyp1b1
Cyp1b1
Sptssb Alox15
Tecta Cyp26b1
Crabp2 Cyp27a1
Alas2
AABR07024441.1
Isg15
P1c P1b P1a P21b P21c P21a P7b P7c P7a P1a P1b P1c P21c P21b P21a P7b P7a P7c Oas12
CH组 对照组 Hmgcs2 Hdc
A：P1、P7和P21大鼠海马组织测序的热图和树状图，两组各时间点均重复3次；B：利用IPA软件构建的重组基因网络。
图1 介导CH大鼠海马神经元异常的关键因素分析
Figure 1 Analysis of key factors in mediating aberrant hippocampal neurons of CH rats
海 马 神 经 元 CAMK4 的 siRNA 转 染 实 验 中 ，在
P1 P7 P21
C D C D C D
70 kDa— CAMK4 水平敲降约 50%的条件下，PCR 检测 EGR3
CAMK4
55 kDa— 的相应表达情况，可以发现随着 CAMK4 的表达下
40 kDa— 降，EGR3 的基因水平也显著降低（图 5A），验证了
GAPDH
35 kDa—
CAMK4可以调控EGR3的表达。在体内水平，通过
2.0
* * Western blot 检 测 EGR3 的 蛋 白 表 达 情 况 ，如 前
CAMK4蛋白表达水平 1.0 *** *** 大鼠在P7及P21均明显低于正常大鼠（图5B）。
*
CAMK4 的表达趋势，EGR3 呈时间依赖性增加，CH
1.5
讨 论
3
0.5
3.1 甲状腺功能减退对生长发育的影响
0
C D C D C D 在课题组的前期研究中已成功验证了CH大鼠
P1 P7 P21 模型的构建 。TH 对神经系统的发育及功能调节
［9］
两组比较，P < 0.05， P < 0.001；C：对照组；D：CH组。
***
*
十分重要，特别在胎儿期和婴儿期，甲状腺激素不
图2 Western blot分析CH大鼠海马Camk4的表达
Figure 2 Expression of Camk4 in the hippocampus of CH 足会严重影响脑的发育、分化和成熟，且不可逆转，
rats by Western blot 对胎儿产生不利的妊娠结局 ［10］ 。临床上CH患儿的
主要特征包括智能落后、生长发育迟缓和生理功能
CAMK4 的再表达并对海马神经元的树突产生影 低下 ［11］ 。在实验中观察到 CH 大鼠的体格发育较
响。分别从基因、蛋白质水平验证，在CH原代海马 正常大鼠明显落后，体重增长缓慢，外观上 CH 大
神经元中加入 5 nmol/L T3 后，CAMK4 的 RNA 及蛋 鼠毛发光泽差、耳廓贴颅，且运动迟缓，与临床表
白表达均呈时间依赖性上升（图 4A、B）。同时观察 现相一致。
加入T3后24 h及48 h神经元树突的变化，结果显示 3.2 甲状腺功能减退时CAMK4的调节
加入T3后神经元树突平均长度均增加，且48 h最明 在构建的 CH 大鼠模型中，甲减组的 T3 水平显
显（图4C、D）。 著低于正常组，T3与TR的功能性受体（TRα1、TRβ1
2.5 EGR3的表达情况 和TRβ2）结合减少，而这3种功能性受体与T3的结
在大鼠海马组织测序结果中，通过 IPA 基因网 合能够解除 CAMK4 启动子 TH 反应元件的抑制状
络图发现CAMK4⁃EGR3存在相关性。因此，在原代 态，因此在 CH 大鼠中，低 T3 水平可导致 CAMK4 基