Page 22 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第8期
·1124 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年8月

（ % ） 120 0 0.1 0.5 1.0 （ % ） 150 ** ** G2/M
A B 帕博西尼（μmol/L） D **
细胞相对增殖率 50 细胞周期分布 100 G1
100
S
50

0
00 0.5 1.0 1.5 2.0 0 0 0.1 0.5 1.0
帕博西尼（μmol/L） 帕博西尼（μmol/L）
C
0 μmol/L 0.1 μmol/L 0.5 μmol/L 1.0 μmol/L
1 000 2 000
1 400
G1：56.89% G1：76.57% G1：85.3% G1：89.54%
800 1 500 1 200
1 500 1 000
Number 600 Number 1 000 Number 1 000 Number 800
400
S：31.1% S：14.68% 500 S：9.1% 600 S：7.27%
500 400
200
G2：12.01% G2：8.75% G2：5.6% 200 G2：3.19%
0 0 ▲ ▲ 0 ▲ ▲ 0 ▲ ▲
0 100 200 300 400 500 600 700 0 100 200 300 400 500 600 700 0 100 200 300 400 500 600 700 0 100 200 300 400 500 600 700
FL2⁃A FL2⁃A FL2⁃A FL2⁃A
E F
0 μmol/L 1 μmol/L 3 μmol/L 300 *
129 200 276
80 84.4 200 200
150 细胞内ROS浓度 *
60
150
Count 40 Count 100 Count 100 100
20 50 50 0 对照组 1 3
帕博西尼（μmol/L）
0 0 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4
FL1⁃H：ROS FL1⁃H：ROS FL1⁃H：ROS
A：Alamar blue实验检测HT29细胞对梯度浓度的帕博西尼处理的短期增殖效应（n=6）；B：克隆实验检测HT29细胞对不同浓度的帕博西
尼处理后细胞的克隆形成能力（n=3），选取代表性图像。C：流式细胞术检测不同浓度帕博西尼处理HT29后的细胞周期分析；D：对细胞周期
中各时期占比的统计图；E：HT29 细胞在帕博西尼处理后，使用胞内 ROS 荧光探针 DCFH⁃DA 标记细胞内 ROS，进行流式细胞术分析；F：对
HT29胞内ROS含量进行定量统计。两组比较，P＜0.01，P＜0.001。
**
*
图1 帕博西尼抑制HT29细胞增殖抑制、诱导细胞周期阻滞和胞内ROS积累
Figure 1 Palbociclib inhibited HT29 cell proliferation，induced cell cycle arrest and intracellular ROS accumulation

著的协同效应后，研究了两药联合对细胞周期和胞 力，接下来利用患者来源的肿瘤组织构建 PDX 模
内ROS累积的影响。同样，帕博西尼单独处理后导 型，在小鼠体内对这种治疗方案进行评估，包括治
致细胞周期发生G1期阻滞，尽管厄洛替尼单独处理 疗效果以及不良反应。P328 PDX 源自 1 例 54 岁女
对于细胞周期的影响有限，但是厄洛替尼的加入进 性结直肠癌患者，她被诊断为Ⅳ期低分化黏液性结
一步加剧了帕博西尼诱导的 G1 期阻滞（图 3A、B）。 直肠腺癌。在 P328 PDX 模型中，使用帕博西尼（25
随后我们在 HT29 细胞中检测了联合处理后胞内 mg/kg）联合厄洛替尼（50 mg/kg）灌胃治疗后，在实
ROS 水平的变化。HT29 细胞经单药或联合用药处 验终止日即给药后 26 d，对照组的肿瘤体积是联合
理后，使用 ROS 探针 DCFH⁃DA 与细胞内的 ROS 进 治疗组的 2.9 倍（图 4A），帕博西尼单药治疗和厄洛
行氧化水解反应形成带有荧光的DCF，流式细胞仪定 替尼单药治疗组则分别是联合治疗组的 1.6 倍和
量细胞的荧光强度（图3C、D），结果显示，与单药治疗 1.4 倍。与此同时，接受联合治疗的小鼠体重下降
相比，联合治疗显著增强了细胞内ROS的积累。 了 9%~26%（图 4B），提示厄洛替尼在高剂量下存

2.4 在结直肠癌 PDX 模型中验证两药联用的体内 在一定的不良反应。图 4C 显示了药物处理后
疗效 PDX328 的肿瘤大小（因联合治疗组和厄洛替尼治
体外实验已经证明帕博西尼和厄洛替尼对结 疗组分别有 1 只小鼠死亡，最后每组各收集了 4 个
直肠癌细胞具有显著的联合抑制效应，为了进一步 肿瘤），联合治疗组的肿瘤体积呈现出明显小于对
评估这种治疗组合对结直肠癌患者的适用性和潜 照组和单药治疗组肿瘤的趋势。