Page 28 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第8期
·1130 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2021年8月

1.2.6 细胞划痕实验 食物和高压蒸馏水。用 100 μL 的 PBS 重悬各组胃
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配置胃癌细胞悬液，将每组细胞悬液稀释成5× 癌细胞（细胞数量均为 5×10 个），分别皮下注射到
10 个/mL。将上述细胞悬液加入 ibidi 双孔小室中， 每只小鼠的腋下（每组n=4）。4周后，对小鼠实施安
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每个小室加入 70 μL 细胞悬液，细胞贴壁后用无菌 乐死，并对肿瘤称重。
镊子取出小室，并加入2 mL完全培养基，在0、12和 1.3 统计学方法
24 h 时间点，观察细胞并使用配有照相机的倒置显 所有定量数据均表示为平均数±标准差（x ±
微镜捕获图像。 s）。使用 t 检验分析正态分布数据之间的统计学差
1.2.7 细胞侵袭实验 异。P < 0.05为差异有统计学意义。统计分析使用
使用24孔铺胶侵袭小室进行细胞侵袭测定，收 的软件包括Image J 1.8.0，GraphPad Prism 8。
获稳定转染胃癌细胞，并以1×10 个/ mL的密度悬浮
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2 结 果
在无FBS的DMEM培养基中。接下来，将200 μL的
细胞悬液加到上室中，同时将 500 μL 的含有 10％ 2.1 PPP2CA、WTAP 在胃癌组织中表达异常，二者
FBS的DMEM添加到底部小室中。于细胞培养箱中 均与胃癌预后相关
培养 24 h 后，用棉签除去上室中未迁移的细胞，并 通过癌症基因组图谱（The Cancer Genome At⁃
将过滤器底部侵袭的细胞在4％的低聚甲醛中于室 las，TCGA）数据库（https：//www.cancer.gov）比较胃癌
温固定 5 min。PBS 洗涤后，用结晶紫染色，并在相 组织及癌旁正常胃黏膜组织中的 PP2Acα编码基因
差显微镜下在5个随机选择的视野中以×10的放大 PPP2CA 和 WTAP 的 mRNA 表达水平，发现 PPP2CA
倍数（物镜）进行计数。 在胃癌组织中明显下降（P=0.037；图1A），而WTAP在
1.2.8 裸鼠成瘤实验 胃癌组织中显著上升（P<10 ，图1B）。通过KM⁃plot
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本动物实验伦理由南京医科大学实验动物中 网站（http：//kmplot.com/analysis/）进行生存率分析，结
心批准（IACUC⁃2103060）。为了建立胃癌细胞的异 果显示PPP2CA高表达组、WTAP低表达组的预后显
种移植模型，从南京医科大学动物实验中心购买裸 著优于各自的对照组（图 1C、D）。以上结果表明
鼠（雌性，4 周龄）。在注射之前，在以下标准条件 PPP2CA在胃癌组织中表达明显下降，而WTAP在胃
下，将小鼠在无特定病原体的环境中饲养 1 周：光 癌组织中却显著升高，且二者均与胃癌的预后密切
照/黑暗周期 12 h，温度 25 ℃，湿度 40%~60％，灭菌 相关。

A B WTAP在STAD项目
65.6%的患者PPP2CA mRNA 120 样本中的表达
表达下调（P=0.037）
1.0
PPP2CA mRNA表达 N * =肿瘤/ （ log2N * ） 癌旁正常组织 -0.5 0 每百万转录体 （ TPM ） 100
-12
P＜10
0.5
80
60
40
-1.0
20
水平
-1.5
WTAP（214759_at）
C -2.0 PPP2CA（208652_at） D 0 正常组织（n=34）肿瘤组织（n=415）
1.0 Expression 1.0 HR=1.25（1.07~1.51）
low
0.8 0.8 logrank P=0.002
high
生存率 0.6 生存率 0.6
0.4
0.4
Expression
0.2 HR=0.79（0.66~0.93） 0.2 low
logrank P=0.005 7 high
0 0
0 50 100 150 0 50 100 150
时间（月） 时间（月）
Number at risk Number at risk
low 370 110 21 1 low 653 253 41 1
high 505 188 27 0 high 222 063 07 0
A、B：TCGA数据库中，PPP2CA（A）、WTAP（B）的mRNA表达情况；C、D：在KM⁃plot网站（http://kmplot.com/analysis/）中，PPP2CA（C）、WTAP
（D）在胃癌患者中的生存率曲线图。
图1 PPP2CA、WTAP在胃癌中的表达及其与胃癌预后的关系
Figure 1 The expression of PPP2CA and WTAP in gastric cancer and their relationship with the prognosis of gastric cancer