Page 77 - 南京医科大学学报自然科学版

第41卷第8期 李济民，朱 辉，徐 可，等. 氯吡格雷低反应冠心病患者血小板miRNA表达谱差异［J］.
2021年8月 南京医科大学学报（自然科学版），2021，41（08）：1178-1184 ·1179 ·

group was significantly higher than that of the control group（P < 0.000 1）. The total RNA pools of the two groups were detected by
RNA denaturation electrophoresis and no significant degradation was found. 95 platelet miRNAs were differently expressed by high⁃
throughput sequencing between the two groups，among which 20 miRNAs（hsa⁃miR⁃300，hsa⁃miR⁃151b，hsa⁃miR⁃1299，et al）were 2⁃
fold down⁃regulated in CLR patients，and 8 miRNAs（hsa⁃miR⁃188⁃5p、hsa⁃miR⁃6874⁃3p、hsa⁃miR⁃218⁃5p、hsa⁃miR⁃3150b⁃3p、hsa⁃
miR⁃1288⁃3p、hsa⁃miR⁃1299、hsa⁃miR⁃6862⁃5p、hsa⁃miR⁃4421）were identified by at least two target gene predicting software as
having regulatory effects on key proteins associated with platelet aggregation. Conclusion：There is a significant downregulation of
platelet miRNAs in CLR patients. We successfully screen 8 miRNAs that could modulate the key protein in the process of platelet
aggregation，which is warrant to be investigated in future study.
［Key words］ coronary artery disease；clopidogrel low response；platelet；miRNA；expression profile
［J Nanjing Med Univ，2021，41（08）：1178⁃1184］

抗血小板治疗是冠心病（coronary artery dis⁃ 不稳定型心绞痛（unstable angina pectoris，UA）或稳
ease，CAD）药物治疗的基石。作为二磷酸腺苷（ade⁃ 定型心绞痛（stable angina pectoris，SA）；③签署知情
nosine diphosphate，ADP）受体拮抗剂，氯吡格雷被 同意书。排除标准：①氯吡格雷过敏或不耐受者；
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广泛应用于急性冠脉综合征（acute coronary syn⁃ ② 高出血风险患者（如血小板计数<80×10 /L、活动
drome，ACS）或冠状动脉支架植入后的CAD患者 ［1-2］ 。 性消化性溃疡、近期脑外伤史等）；③ 计划服用华法
但研究发现，氯吡格雷的抗血小板疗效存在显著的 林或可能干扰氯吡格雷［如细胞色素P450 3A（cyto⁃
个体差异，20%以上的患者在服用常规剂量的氯吡 chrome P450 3A，CYP3A）抑制剂或 CYP3A 诱导剂
格雷时血小板聚集功能未被有效抑制 ，称为氯吡 等］抗血小板疗效的药物。本研究已在clinicaltrials.
［3］
格雷低反应性（clopidogrel low response，CLR）或氯 gov 网站注册，ID号：NCT02447809。
［4］
吡格雷抵抗（clopidogrel resistance，CR） 。研究显 光 学 血 小 板 聚 集 仪（light transmittance ag⁃
示，CLR 患者的支架内血栓、心肌梗死和全因死亡 gregometry，LTA；540VS，Chronolog公司，美国），全自
［5］
的风险显著增加 。 动血液分析仪（XS⁃500i，Sysmex公司，日本），高速离
microRNA（miRNA）是一类长 18~22 nt 的非编 心机（Centrifuge 5810 R）、移液枪（Eppendorf 公司，
码 RNA，其可通过与靶信使核糖核酸（messenger 德国），反应杯、搅拌磁棒（Chronolog 公司，美国），漩
RNA，mRNA）特异性结合，在转录后水平调控靶基 涡震荡仪（上海青浦泸西仪器厂），pH 计（上海仪电
因的表达。Nagalla等 发现健康志愿者中血小板高 科学仪器股份有限公司），去离子水制水设备（Mer⁃
［6］
反应组与正常反应组间血小板 miRNA 存在表达差 ck Millipore 公司，德国），电泳仪（Bio⁃Rad 公司，美
异，miRNA可以通过与mRNA结合来调控血小板蛋 国），凝胶成像系统（上海天能科技有限公司），Agi⁃
白的表达，从而影响血小板活性。本研究旨在通过 lent 2200TapeStation（Agilent Technologies 公 司 ，美
筛查CLR患者血小板miRNA表达的差异，探寻对血 国），Qubit 2.0（Life Technologies 公司，美国），Hiseq
小板聚集关键蛋白（P2Y12受体、Gi2α蛋白、血小板糖 2500（Illumina 公司，美国），台式低温高速离心机、
蛋白Ⅱb/Ⅲa 受体）可能有调控作用的 miRNA，为个 分光光度计、水浴锅（Thermo Fisher Scientific 公司，
体化抗血小板治疗提供新的靶标。 美国），磁珠分选磁铁架（Miltenyi Biotec 公司，德
国），电子天平（Mettler Toledo公司，瑞士），净化工作
1 对象和方法
台（苏州安泰空气技术有限公司），制冰机（SANYO
1.1 对象 公司，日本），Illumina Hiseq 2500测序仪（Illumina公
连续入选2015年4月—8月在南京医科大学第 司，美国）。
一附属医院心血管内科经常规氯吡格雷治疗（负荷 TRIzol（Invitrogen 公司，美国），mirVana TM miR⁃
剂量 300 mg，维持剂量 75 mg/d）至少 5 d 的 CAD 患 NA Isolation Kit（Life Technologies 公 司 ，美 国），
者 78 例。入选标准：①年龄 18~80 岁；②入院诊断 CD45 MicroBeads，human（Miltenyi Biotec 公 司 ，德
为急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）、 国），Small RNA Sample Prep Kit（Illumina 公司，美